Um protocolo simples e eficiente para o isolamento de RNA funcional de alta qualidade de diferentes tecidos de cúrcuma (Curcuma longa L.)

Muitos experimentos em biologia molecular de plantas requerem o processamento de um grande número de amostras de RNA e, em alguns casos, grandes quantidades são necessárias para uma única aplicação. No açafrão, uma importante especiaria e planta medicinal, um protocolo para isolamento de RNA não está disponível. A principal dificuldade encontrada ao usar outros protocolos populares é o baixo rendimento e qualidade do RNA, o que dificulta as aplicações a jusante como qRT-PCR, síntese de cDNA e isolamento de micro RNA. Os kits comerciais, embora disponíveis, são caros e não tiveram sucesso no caso de rizomas e tecidos radiculares ricos em polifenóis, polissacarídeos e alcalóides. Sentiu-se, portanto, que um protocolo rápido, prático e barato de isolamento total de RNA de diferentes tecidos de açafrão era necessário para o trabalho diário em nosso laboratório. O novo protocolo utiliza tampão de extração baseado em SDS incluindo β-mercaptoetanol e PVP com extração sequencial de ácido fenol: clorofórmio para remover polifenóis e proteínas, seguida pela purificação com acetato de sódio para eliminar polissacarídeos. O protocolo é simples e pode ser concluído em menos de 3 horas. O rendimento de RNA do rizoma foi maior em mais de cinco vezes com a razão A260 / 280 e A260 / 230 na faixa de 1,8-2,0. O protocolo funcionou bem com tecidos de folha, rizoma, pseudocaule e raiz com RIN> 7.0 e o RNA isolado pode ser usado com sucesso para a síntese de cDNA, RT-PCR, qRT-PCR e isolamento de pequenos RNAs incluindo microRNA.