p72, uma proteína marcadora da ação da melatonina em células ovinas pars tuberalis: sua regulação pela proteína quinase A e proteína quinase C e secreção diferencial em relação à prolactina

A função da pars tuberalis como mediador da ação da melatonina permanece indefinida. Como um método direto de avaliação do papel potencial das proteínas secretoras, células ovinas pars tuberalis foram cultivadas e radiomarcadas com 35S-metionina e o acúmulo de produtos radioativos específicos no meio, medido após a separação por SDS-PAGE e fluorografia. A síntese e a secreção de várias proteínas marcadas são aumentadas pela forscolina (1 microM) e inibidas de forma dependente da dose pela melatonina (IC50, 300 pM), embora consistentemente uma proteína de 72 kD (p72), é a mais intensamente marcada delas. Assim, 72 atua como um marcador útil da atividade celular para a melatonina, enquanto a prolactina (p23) fornece um marcador não responsivo à melatonina em culturas de células da pars tuberalis ovina. A síntese e secreção de p72 e outras proteínas sensíveis à melatonina são reguladas através da via do segundo mensageiro AMP cíclico / proteína quinase A, pois análogos do AMP cíclico imitam a ação da forscolina, mas 1,9-didesoxiforscolina, um análogo da forscolina não ativo na adenilato ciclase, não tem efeito. No entanto, o éster de forbol, acetato de forbol-12,13-miristato, também regula a síntese e a secreção do mesmo perfil de proteínas que a forscolina, indicando um papel potencial para a proteína quinase C, que ocorre por meio de uma via independente ao invés de sinérgica. Os efeitos diferenciais do nocadazol (1 microM) e depleção de cálcio extracelular sobre a secreção de p72 e prolactina indicam que o p72 é secretado por uma via independente de cálcio e microtúbulos, em contraste com a prolactina. Estas observações em conjunto com a ausência de vesículas de armazenamento de núcleo denso em células responsivas à melatonina do PT ovino são consistentes com a secreção constitutiva de p72 deste último e a secreção regulada de prolactina de células não responsivas à melatonina. Usando imunoprecipitação, síntese de novo e secreção de proteínas LH ou semelhantes a LH de células ovinas pars tuberalis não puderam ser detectadas nas condições utilizadas. A ausência de 125I- (Des-Gly10[D-Ala6]A ligação -LHRH-etilamida) sobre a maioria, mas não todas, da pars tuberalis ovina apóia a alegação de que a maioria das células da pars tuberalis ovina não são gonadotróficos. Esses resultados fornecem mais suporte para a função única da pars tuberalis.