Determinação de melatonina e monoaminas na pineal de rato usando cromatografia de interação iônica de fase reversa com detecção de fluorescência

Um método é relatado para a interação de íons, separação de fase reversa de 24 compostos (principalmente monoaminas) decorrentes do metabolismo da tirosina e do triptofano. Esses compostos foram separados em dois grupos. O primeiro grupo compreendia 3,4-dihidroxifeniletilenoglicol, tirosina, 3-metoxi-4-hidroxifenilglicol, 5-hidroxitriptofano, norepinefrina, ácido 3,4-dihidroxifenilacético, epinefrina, ácido 5-hidroxiindol-3-acético, ácido homovanílico, 5 -hidroxitriptofol, dopamina, triptofano. N-acetilserotonina, N-acetiltriptofano, 5-metoxitriptofano e serotonina. A fase móvel consistia em uma mistura 6,8: 93,2 (v / v) de acetonitrila e uma solução aquosa contendo fosfato de amônio 0,16 M, ácido cítrico 0,06 M, EDTA dissódico 0,15 mM, dibutilamina 10 mM e 1-octanossulfonato de sódio 6 mM em pH 4,50 . O segundo grupo de compostos compreendia 6-hidroximelatonina, ácido 5-metoxiindol-3-acético, ácido indol-3-acético, 5-metoxitriptamina, triptamina, 5-metoxitriptofol, melatonina e triptofol. A fase móvel consistia em uma mistura 16:84 (v / v) de acetonitrila e uma solução aquosa contendo fosfato de amônio 0,05 M, ácido cítrico 0,05 M, EDTA dissódico 0,15 mM, dibutilamina 25 mM e 1-octanossulfonato de sódio 5 mM em pH 5,30 . A detecção foi por medição de fluorescência (lambda ex = 280 nm, lambda em = 340 nm). O método proposto exibiu calibração linear na faixa de concentração bioquimicamente significativa, com limites de detecção na faixa de 10-200 pg. Excelente precisão para áreas de pico e tempos de retenção foi observada, mesmo por um período de 24 h. A aplicabilidade da detecção amperométrica (em 0,72 V) também é demonstrada. O método é aplicado à determinação de monoaminas em pineais de ratos individuais. Níveis baixos de nanogramas de tirosina, norepinefrina, ácido 5-hidroxiindol-3-acético, triptofano, serotonina e 6-hidroximelatonina e níveis de 5-hidroxitriptofano, 5-hidroxitriptofol, ácido 5-metoxiindol-3-acético, indol 3-acético ácido, 5-metoxitriptofol e melatonina foram indicados na maioria das amostras.