Monitoramento das concentrações de melatonina salivar em crianças com distúrbios do sono usando espectrometria de massa acoplada à cromatografia líquida

Fundo: A melatonina é sintetizada na glândula pineal e é um importante marcador da fase circadiana, principalmente na determinação dos padrões de sono. Tanto os padrões de sono anormais temporários quanto os permanentes ocorrem em crianças; portanto, é desejável ter métodos para monitorar a melatonina em fluidos biológicos no diagnóstico e tratamento de tais distúrbios.

Objetivo: O objetivo do estudo é desenvolver um método de cromatografia líquida-espectrometria de massa em tandem para a determinação de melatonina na saliva e aplicá-lo ao monitoramento das concentrações salivares em crianças com distúrbios do sono.

Métodos: Um padrão interno deuterado (d7-melatonina) foi adicionado a uma amostra de saliva diluída (20 µL) em uma inserção de frasco de amostrador automático e 50 µL foram injetados. O material plástico foi estritamente evitado e todo o material de vidro foi cuidadosamente limpo e depois cozido a 120 ° C por pelo menos 48 horas para obter um desempenho satisfatório. A cromatografia de fase reversa foi realizada em uma coluna C8 usando um perfil de eluição de gradiente linear compreendendo as fases móveis A (0,1% de ácido fórmico aquoso) e B (15% de metanol em acetonitrila contendo 0,1% de ácido fórmico), bombeadas a uma taxa de fluxo total de 0,8 mL / min. O tempo de execução foi de 8 minutos. Após a ionização química à pressão atmosférica, a detecção por espectrometria de massa estava no modo de íon positivo. A detecção de massa foi pelo modo de monitoramento de reação selecionado com as seguintes transições de massa usadas para quantificação: melatonina, m / z 233,0 → 173,8 e d7-melatonina, m / z 240,0 → 178,3.

Resultados: A linearidade (r> 0,999) foi estabelecida de 3,9 a 1000 pg / mL. A imprecisão (porcentagem do coeficiente de variação) foi inferior a 11% e a precisão foi de 100-105% (7,0-900 pg / mL). O método foi seletivo, e a proporção média (intervalo) das inclinações das calibrações na água para as amostras de saliva diurna coletadas de 10 indivíduos adultos saudáveis ​​foi de 0,989 (0,982-0,997), indicando efeitos de matriz desprezíveis. A aplicação do ensaio foi demonstrada em adultos saudáveis ​​e em crianças sendo clinicamente investigadas para distúrbios do sono.

Conclusões: É relatado um método validado de espectrometria de massa em tandem por cromatografia líquida adequado para monitorar a melatonina salivar em crianças com distúrbios do sono no ritmo circadiano. O método também tem aplicação potencial em estudos farmacocinéticos de populações pediátricas usando amostras esparsas de saliva como a matriz da amostra biológica.