Radioimunoensaio de concentrações séricas de melatonina em ovelhas expostas a diferentes regimes de iluminação

Um radioimunoensaio de anticorpo duplo específico e sensível para melatonina (N-acetil-5-metoxitriptamina) foi desenvolvido utilizando anti-soros de coelho para um conjugado de albumina sérica bovina de N-succinil-5-metoxitrptamina e utilizando N-3- (4-hidroxifenil) -propionil-5-metoxitriptamina para radioiodação. A concentração menos detectável de padrão de melatonina foi de 10 pmolar (2,3 pg / tubo) com 50% de inibição de resultado de curvas de inibição obtidas com quantidades crescentes de melatonina ou quantidades crescentes de extratos de clorofórmio de soros ovinos foram paralelas. A imunorreatividade encontrada em soros ovinos migrou com [3H]melatonina em sílica gel G quando desenvolvida com clorofórmio: metanol (9: 1). N-acetilserotonina, 5-metoxitriptamina, serotonina, triptofano, 6-hidroximelatonina, 6-metoxitetrahidroharmalano e vários outros compostos de indol e beta-carbolina não influenciam a estimativa de melatonina no radioimunoensaio. As concentrações de melatonina puderam ser determinadas com precisão quando 31 a 1000 pg foram adicionados a 1 ml de soro ovino. As amostras de soro com concentrações de melatonina de 1000 pg / ml, 500 pg / ml e 75 pg / ml tiveram coeficientes de variação intra-ensaio de 9,1%, 8,6% e 17,4%, respectivamente. Os respectivos coeficientes de variação inter-ensaio foram 22,7%, 18,1% e 37,1%. Ovelhas expostas a um regime de 12 h de luz: 12 h de iluminação escura demonstraram um ritmo circadiano nas concentrações séricas de melatonina. As concentrações variaram de 10-30 pg / ml durante os períodos de luz a 100-300 pg / ml durante os períodos de escuridão. Durante a exposição à luz contínua, o ritmo circadiano foi abolido e as concentrações de melatonina foram mantidas em 10-50 pg / ml. Quando exposto a condições de escuridão contínua, o ritmo circadiano persistiu. Uma queda abrupta nas concentrações séricas de melatonina resultou quando ovelhas que experimentaram o pico das concentrações de melatonina foram expostas à luz. As concentrações voltaram aos níveis máximos quando as luzes foram desligadas 3,5 h depois.