O ácido docosahexaenóico inibe a proliferação de células de adenocarcinoma ductal pancreático duplo mutante Kras / TP53 por meio da modulação do nível de glutationa e supressão da síntese de nucleotídeos

Células humanas HPAF-II tratadas com DHA (em concentrações de 0, 50, 100 e 150 μM) em meio FBS MEM a 10% por 24 h. (A) A análise do nível de cisteína celular foi realizada conforme descrito em Materiais e Métodos. Um único asterisco representa um valor estatisticamente significativo em comparação com o subgrupo não tratado de células HPAF-II, em P <0,05. (B) A análise do nível de NADP / NADPH celular foi realizada conforme descrito em Materiais e Métodos. Um único asterisco representa uma diferença estatisticamente significativa em comparação com o subgrupo não tratado de células HPAF-II em 24 h, em P <0,05. Um asterisco duplo (**) representa uma diferença estatisticamente significativa em comparação com o subgrupo não tratado de células HPAF-II em 48 h, em P<0,05. (C) Análise de Western blot de proteínas citoplasmáticas (no ponto de tempo de 24 h) usando anticorpos monoclonais contra p-EGFR (Tyr 1068), pc-Met (Tyr1234 / 1235), p-STAT3 (Tyr705), t-STAT3, xCT, CBS, CTH, GSS e controles internos (actina). As intensidades de banda representam as quantidades de p-EGFR (Tyr 1068), pc-Met (Tyr1234 / 1235), p-STAT3 (Tyr705), xCT, CBS, CTH e GSS no citoplasma de células HPAF-II. (D) Células humanas HPAF-II tratadas com Lapatinibe (inibidor de EGFR, 5 μM), PHA-665752 (inibidor de c-Met, 0,5 μM) ou Ruxolitinibe (inibidor de STAT3, 15 μM) por 24 h. Análise de Western blot de proteínas citoplasmáticas (no ponto de tempo de 24 h) usando anticorpos monoclonais contra p-p-STAT3 (Tyr705), t-STAT3, xCT e actina. As intensidades das bandas representam as quantidades de p-STAT3 (Tyr705) e xCT no citoplasma das células HPAF-II. (E) Células HPAF-II foram pré-tratadas com 2,5 μM de erastina ou 250 μM de sulfassalazina (SSZ) por 24h e seguido por tratamento de DHA (0, 50, 100 e 150 μM) por 24h. Os efeitos da erastina ou SSZ foram medidos usando o ensaio de exclusão de azul tripano descrito acima. A significância estatística é expressa como a média ± DP (desvio padrão) de duas experiências independentes. Letras diferentes representam uma diferença estatisticamente significativa entre os diferentes subgrupos (em