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Lipidômica de ácidos graxos poliinsaturados oxidados

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. Junho de 2013; 59 (100): 45-55.
doi: 10.1016 / j.freeradbiomed.2012.08.565. Epub 2012, 19 de agosto.

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Karen A Massey et al. Free Radic Biol Med. Junho de 2013.

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Resumo

Os mediadores lipídicos são produzidos a partir da oxidação de ácidos graxos poliinsaturados por meio de reações enzimáticas e mediadas por radicais livres. Quando sujeitos à oxigenação por meio de ciclooxigenases, lipoxigenases e monooxigenases do citocromo P450, os ácidos graxos poliinsaturados dão origem a uma variedade de metabólitos, incluindo eicosanóides, docosanóides e octadecanóides. Esses potentes lipídios bioativos estão envolvidos em muitas vias bioquímicas e de sinalização, sendo a inflamação de particular importância. Além disso, como são produzidos por mais de uma via e substrato, e estão presentes em uma variedade de ambientes biológicos, sua análise nem sempre é possível com os ensaios convencionais. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa por eletrospray oferece uma abordagem versátil e sensível para a análise de lipídios bioativos, permitindo a quantificação específica e precisa de várias espécies presentes na mesma amostra. Aqui, explicamos os princípios desta abordagem para a lipidômica mediadora e apresentamos protocolos detalhados para o ensaio de metabólitos oxigenados de ácidos graxos poliinsaturados produzidos enzimaticamente que podem ser adaptados para responder a questões biológicas ou facilitar a avaliação de intervenções nutricionais e farmacológicas.

Figuras

Nenhum
Resumo gráfico
Figura 1
Figura 1

Esquema mostrando uma visão resumida das principais vias envolvidas na produção de mediadores oxigenados derivados de ácidos graxos poliinsaturados. acCOX-2, COX-2 acetilado.

Figura 2
Figura 2

Espectros ESI – MS para os mediadores derivados de AA PGE2, 12 SEMANAS, LXA4, e 11 (12) -EET, o 18-HEPE e RvE derivado de EPA1, e o 17-HDHA e RvD derivado de DHA1.

Fig. 3
Fig. 3

Fluxograma mostrando as etapas principais para o ensaio lipidômico do mediador LC / ESI – MS / MS.

Fig. 4
Fig. 4

Cromatogramas típicos que mostram a separação quiral do 15- derivado de AAe-LXA4 e LXA4, 18 derivado de EPA (R) – e 18 (S) -HEPE, o 15 derivado de AA (R) – e 15 (S) -HETE, e 17 derivado de DHA (R) – e 17 (S) -HDHA por LC / ESI – MS / MS (condições experimentais conforme descrito no Protocolo; 15-e-LXA4, 2,5 ng na coluna; todos os outros mediadores, 250 pg na coluna).

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Referências

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