Colesterol e ácidos graxos ômega-3 inibem a atividade de Na, K-ATPase em células endoteliais humanas

Nós investigamos os efeitos do colesterol e dos ácidos graxos ômega-3, ácido eicosapentaenóico (EPA) e ácido docosahexenóico (DHA) na atividade de Na, K-ATPase em células endoteliais humanas (HUVEC). As HUVEC cultivadas foram incubadas durante 18 h com fosfatidilcolina de ovo pura (PC) ou lipossomas enriquecidos com colesterol (4 mg PC / ml). EPA e DHA alfa-tocoferol-acetato foram emulsionados com PC e incubados com HUVEC (10 mM). As atividades de Na, K-ATPase e 5′-nucleotidase foram determinadas usando o método de ensaio acoplado em frações microssomais obtidas de células cultivadas usando células não tratadas como controle. O enriquecimento de colesterol reduziu significativamente as atividades de Na, K-ATPase e 5′-nucleotidase em um nível semelhante (- 40%), enquanto os lipossomas de fosfolipídios puros inibiram essa atividade apenas em 22%. As curvas de dose-resposta da atividade de Na, K-ATPase foram todas bifásicas, assumindo a presença de dois locais independentes exibindo diferentes afinidades para ouabaína de nM e microM, respectivamente. O efeito inibitório induzido pelo colesterol foi maior para locais de baixa afinidade (-54%) em comparação com os locais de alta afinidade (-24%), enquanto os ácidos graxos ômega-3 reduziram a atividade de ambos os locais em 22%. Os efeitos de curto prazo de EPA e DHA na atividade de Na, K-ATPase foram determinados incubando frações microssomais de células não tratadas com várias concentrações de ácidos graxos livres (de 1 a 200 microM) por 20 min. Tanto o EPA quanto o DHA reduziram significativamente a atividade da Na, K-ATPase, mas a inibição pelo EPA parece ser mais eficaz do que o DHA. Esses resultados sugerem que o colesterol e os ácidos graxos ômega-3 reduzem a atividade da Na, K-ATPase em HUVEC.