A curcumina bloqueia a via coestimulatória de CD28 resistente à ciclosporina A da proliferação de células T humanas

Introdução: A curcumina (Cur) é um componente fenólico da especiaria comum, a cúrcuma. Nós relatamos anteriormente que ele possui propriedades antineoplásicas e imunossupressoras in vitro. Foi relatado que a ciclosporina A (CyA), um imunossupressor comumente usado, não inibe a via coestimulatória de CD28 de ativação de células T. Nossa hipótese é que Cur, um inibidor da tirosina quinase, bloquearia a via coestimulatória de CD28 resistente a CyA da proliferação de células T humanas.

Materiais e métodos: Linfócitos T humanos foram isolados de dadores saudáveis ​​usando centrifugação em gradiente e técnicas de rosetting. Em quatro experiências separadas, as células T foram semeadas em triplicado em placas de 96 poços a uma densidade de 2X105 células / poço. Estas células foram estimuladas com 0,5 ng / ml de acetato de miristato de forbol (PMA) + 0,5 (g / ml de anticorpo anti-CD28 (grupo PMA-CD28) ou 2,5 microgramas / ml de PHA (grupo de PHA). Cur ou CyA em concentrações variáveis ​​(0,31 , 0,625, 1,25, 2,5, 5 ou 10 micrograma / ml e 1,25, 2,5, 5, 10, 20 ou 250 ng / ml, respectivamente) foi adicionado e a proliferação celular foi medida pela absorção de [3H]timidina e é relatado (cpm médio / poço (SD). As células do grupo PMA-CD28 que foram tratadas com curcumina ou 0,4% DMSO (controle de veículo para curcumina) foram estudadas para evidências de apoptose por coloração com corantes viáveis ​​MC540 e Hoechst 33342 e posteriormente analisado no classificador de células.

Resultados: Cur causou uma inibição dependente da concentração da proliferação de células T no grupo PMA-CD28 (de 32775 +/- 3084 a 66 +/- 42 a 5,0 microgramas / ml de cur) e no grupo PHA (de 50956 +/- 5747 a 24 +/- 12 a 5,0 microgramas / ml) com um ED50 calculado de 3,5 e 7,7, microM, respectivamente. CyA inibiu a proliferação de células T no grupo PHA com um ED50 calculado de 2,7 ng / ml, mas falhou em bloquear a proliferação de células T estimuladas por PMA + anti-CD28 mesmo a 250 ng / ml. As células do grupo PMA-CD28 tratadas com 10 microgramas / ml de curcumina mostraram um aumento significativo da apoptose em comparação com o controle (0,4% DMSO).

Conclusão: Uma vez que Cur bloqueia a via de proliferação de células T PMA + anti-CD28 resistente a CyA, ele pode ter novas propriedades imunossupressoras adjuvantes.