Um novo ensaio LC-MS / MS para a determinação simultânea de melatonina e seus dois metabólitos principais, 6-hidroximelatonina e 6-sulfatoximelatonina em plasma de cães: aplicação a um estudo farmacocinético

Um método conveniente e específico de cromatografia líquida-espectrometria de massa em tandem foi desenvolvido e validado para a quantificação simultânea de melatonina (MEL) e seus principais metabólitos, 6-hidroximelatonina (6-O-MEL) e 6-sulfatoximelationina (SO-MEL) em cães plasma. Depois que as amostras de plasma foram desproteinizadas com acetonitrila, as amostras pós-tratamento foram analisadas em uma coluna Phenomenex Kinetex C18 (50 × 2,1 mm, 1,7 μm) com interface com um espectrômetro de massa triplo quadrupolo tandem. O modo de ionização por eletropulverização (ESI) e o monitoramento de múltiplas reações foram usados ​​para testar o MEL e seus metabólitos. Acetonitrila e acetato de amônio 5 mM foram usados ​​como a fase móvel com um gradiente de eluição a uma taxa de fluxo de 0,2 mL / min. O tempo de execução analítica de 6,5 min foi dividido em dois períodos de acordo com o modo de ionização. SO-MEL foi monitorado no modo de ionização negativa (período 1), enquanto MEL e 6-O-MEL foram detectados no modo de ionização positiva (período 2). Todas as curvas de calibração mostraram boa linearidade (r> 0,991) na faixa de concentração com um limite inferior de quantificação (LLOQ) de 0,02 ng / mL para MEL, 0,04 ng / mL para 6-O-MEL e 0,50 ng / mL para SO- MEL. A precisão intra e inter-dia estava dentro de 13,5% em termos de desvio padrão relativo (RSD%) e a precisão dentro de 13,0% em termos de erro relativo. Este método LC-MS / MS conveniente e específico foi aplicado com sucesso ao estudo farmacocinético de MEL e seus metabólitos em cães Beagle após uma dose oral de 2,0 mg de MEL. Após a ingestão de MEL, SO-MEL foi o componente predominante em circulação no sangue. O 6-O-MEL mostrou um perfil farmacocinético semelhante ao do MEL.