Respostas fisiológicas de células da granulosa bovina cultivadas a temperaturas elevadas sob baixo e alto oxigênio na presença de diferentes concentrações de melatonina

Nossa compreensão dos efeitos da temperatura na fisiologia da célula da granulosa (GC) é principalmente limitada a estudos in vitro conduzidos sob atmosfera (∼20% O₂) condições. Na atual série de experimentos fatoriais, identificamos efeitos importantes de O₂ nível (ou seja, 5% vs 20% O₂) na viabilidade de GC e esteroidogênese, e avance para relatar os efeitos das temperaturas padrão (37,5 ° C) vs altas (40,0 ° C) sob temperaturas mais fisiologicamente representativas (ou seja, 5%) O₂ níveis na presença de diferentes níveis de melatonina (0, 20, 200 e 2.000 pg / ml); um potente eliminador de radicais livres e molécula abundante dentro do folículo ovariano. As células aspiradas de folículos antrais (4-6 mm) foram cultivadas em poços revestidos com fibronectina usando M199 sem soro por até 144 h. A 37,5 ° C, o número de células viáveis ​​foi aumentado e a luteinização reduzida abaixo de 5 vs 20% O₂. O nível de oxigênio interagiu (P <0,001) com o tempo em cultura para afetar a atividade da aromatase e o estradiol celular (E₂) produção (pg / mL / 10⁵ células). Estes diminuíram entre 48 e 96 h para ambos O₂ níveis, mas aumentaram novamente em 144 h para células cultivadas abaixo de 5%, mas não 20% O₂. Progesterona (P₄) concentração (ng / mL / 10⁵ células) foi maior (P <0,001) abaixo de 20 vs 5% O₂ em 96 e 144 h. O número de células aumentou (P <0,01) com o tempo em cultura abaixo de 5% O₂ independentemente da temperatura. No entanto, doses mais elevadas de melatonina aumentaram o número de células viáveis ​​a 40,0 ° C, mas reduziram o número de células viáveis ​​a 37,5 ° C (P = 0,004). A melatonina também reduziu (P <0,001) a geração de ROS em ambos O₂ níveis em todas as concentrações. E₂ aumentou com o tempo em cultura em ambas as temperaturas abaixo de 5% O₂, porém P₄ diminuiu entre 96 e 144 ha 40,0, mas não 37,5 ° C. Além disso, a melatonina interagiu (P <0,001) com a temperatura de uma maneira dependente da dose para aumentar P₄ a 37,5 ° C, mas para reduzir P₄ a 40,0 ° C. Expressão de transcrição para HSD3B1 mudanças temporais paralelas em P₄ produção, e aqueles para HBA foram maiores em 5% do que 20% O₂, sugerindo que a síntese de hemoglobina é responsiva a mudanças em O₂ nível. Em conclusão, 5% O₂ aumenta a proliferação de GC e reduz a luteinização. Temperaturas elevadas abaixo de 5% O₂ reduzir a proliferação de GC e P₄ Produção. A melatonina reduz a geração de ROS independentemente de O₂ nível e temperatura, mas interage com a temperatura de uma maneira dependente da dose para influenciar a proliferação de GC e luteinização.