Perfil quantitativo simultâneo de 20 isoprostanóides de ácidos graxos poliinsaturados ômega-3 e ômega-6 por LC-MS / MS em várias amostras biológicas

Os isoprostanóides são um grupo de metabólitos oxigenados não enzimáticos de ácidos graxos poliinsaturados. Pertence ao grupo das oxilipinas, importantes mediadores lipídicos em processos biológicos, como reparação de tecidos, coagulação sanguínea, permeabilidade dos vasos sanguíneos, inflamação e regulação da imunidade. Recentemente, isoprostanoides de eicosapentaenóico, docosahexaenóico, adrenérgico e α-linolênico, ou seja, F3-isoprostanos, F4-neuroprostanos, F2-dihomoisoprostanos e F1-fitoprostanos, respectivamente, têm atraído a atenção por causa de sua contribuição putativa para a saúde. Uma vez que os isoprostanóides são derivados de substratos diferentes de PUFAs e podem ter consequências biológicas semelhantes ou opostas, um perfil de isoprostanóides total é essencial para compreender o efeito geral no modelo de teste. No entanto, a concentração da maioria dos isoprostanóides varia de picograma a nanograma, portanto, um método sensível para quantificar 20 isoprostanóides simultaneamente foi formulado e medido por cromatografia líquida-espectrometria de massa em tandem (LC-MS / MS). A porção lipídica de várias amostras biológicas foi extraída antes da avaliação por LC-MS / MS. Para todos os isoprostanóides LOD e LOQ, e o método foi validado em amostras de plasma para efeito de matriz, o rendimento de extração e a reprodutibilidade foram determinados. A metodologia foi ainda testada para os perfis de isoprostanóides no cérebro e no fígado de camundongos LDLR (- / -) com e sem suplementação de ácido docosahexaenóico (DHA). Nossa análise mostrou níveis semelhantes de F2-isoprostanos e F4-neuroprostanos totais no fígado e cérebro de camundongos LDLR (- / -) não suplementados. A distribuição de diferentes isômeros F2-isoprostano variou entre os tecidos, mas não para F4-neuroprostanos que eram predominados pelo isômero 4 (RS) -4-F4t-neuroprostano. A suplementação de DHA em camundongos LDLR (- / -) aumentou concomitantemente os níveis totais de F4-neuroprostanos em comparação com F2-isoprostanos, mas este efeito foi mais pronunciado no fígado do que no cérebro.