O emparelhamento de sintaxina 3 e SNAP-25, regulado por ácido docosahexaenóico ômega-3, controla a entrega de rodopsina para a biogênese de organelas sensoriais derivadas de cílios, os segmentos externos dos bastonetes

A sintaxina 3 é uma proteína RIS PM. (A) Proteínas de membrana de uma retina foram separadas por SDS-PAGE e imunotransferidas com anticorpos policlonais anti-sintaxina-3 (STX3) e -4 (STX4), que reconhecem especificamente proteínas de -32 kDa. Os asteriscos indicam espécies de maior massa molecular, provavelmente complexos SNARE. (B) Uma seção óptica confocal (0,7 μm) de retina de rã marcada com sintaxina 3 (vermelho), que é altamente concentrada no RIS PM (setas), mas está ausente do ROS e do RPE, conforme relatado (Baixo et al., 2002). AJ, junções aderentes que formam a membrana limitante externa (OLM, linha pontilhada). As camadas retinais são: ONL, nuclear externa; OPL, plexiforme externo; INL, nuclear interno. A sintaxina 3 também é abundante no OPL. Os asteriscos indicam o RIS saliente de bastonetes verdes, uma subpopulação menor que responde por ∼5% do total de bastonetes. Os núcleos são corados com TO-PRO-3 (azul). (C) A sintaxina 4 (verde) está presente nas membranas basais das células RPE (setas), conforme relatado (Low et al., 2002), e na região elipsóide RIS (‘E’, colchete). (D) Um diagrama esquemático da célula fotorreceptora. Cilium (‘C’) se projeta do corpo celular (RIS) e elabora o ROS, que é preenchido com discos membranosos. A rodopsina recentemente sintetizada atravessa o Golgi (‘G’) e o TGN no mióide (‘M’) do RIS, onde é incorporada aos transportadores (RTCs), que viajam através do elipsóide (‘E’) e se fundem com o RIS PM nas proximidades do corpo basal (BB). m, mitocôndrias; N, núcleo; S, sinapse. (E) A sintaxina 3 é altamente concentrada na vizinhança dos cílios (setas), no RIS PM incluindo os CPs (seta, ver também painel K). Também é abundante na metade interna (i) do OPL (colchete, consulte também o painel G), abaixo da linha tracejada que indica a borda da (o) sublâmina interna e externa do OPL. (F) O anticorpo anti-sinaptofisina (SYP, verde) marca os terminais sinápticos de fotorreceptores de bastonete localizados na metade externa (o) do OPL, acima da linha tracejada. Sinaptofisina recentemente sintetizada no Golgi também é detectada. (G) Um diagrama esquemático mostrando o OPL, que engloba as sinapses de bastonetes (`R ‘) e cones (‘ C ‘) na sublâmina externa (o) e o bastão bipolar (RB), cone bipolar (CB) e horizontal células (H) na sublâmina interna (i). (Modificado, com permissão, de http://webvision.med.utah.edu.) (H) Um anticorpo policlonal anti-sintaxina-4 (verde) marca a região elipsóide RIS. (I) Um anticorpo monoclonal anti-sintaxina-4 (verde) mostra localização idêntica à do anticorpo policlonal anti-sintaxina-4. A anti-sintaxina-3 policlonal (vermelho) marca o PM periciliar RIS (setas). (J) Um domínio de membrana semelhante ao marcado por anti-sintaxina-3 policlonal é marcado com um anticorpo para uma proteína ciliar, whirlin (vermelho, setas). (K) Uma imagem EM detalhando a estrutura RIS. A região elipsóide é preenchida com mitocôndrias densamente compactadas (m). Os RTCs atravessam esta região e se fundem na base do cílio (‘C’), no complexo da crista periciliar (CRP, seta). PC, processos calicicos. (L) O anti-redemoinho detecta especificamente o PRC (seta). (M) Sintaxina 3 cofraciona em gradientes de densidade de sacarose linear com o RIS PM identificado por β2 Na, K-ATPase. A quantificação das manchas confirma sua distribuição paralela. Em contraste, 40% da sintaxina 4 é encontrada em uma fração com densidade flutuante maior do que o RIS PM. (N) O anticorpo para α-Na, K-ATPase reconhece especificamente uma proteína de -110 kDa. (O) Na, K-ATPase α-subunidade (verde) é distribuída uniformemente no RIS PM. Asterisco indica RIS de barras verdes. (P) Sintaxina 3 (vermelho) colocaliza com α-Na, K-ATPase (verde) no RIS PM (amarelo, seta), incluindo CPs. A imunorreatividade da sintaxina-3 diminui ao longo do RIS PM lateral para níveis indetectáveis ​​(ponta de seta) e apenas α-Na, K-ATPase é detectada na proximidade do OLM. Barra de escala (mostrada em P): 10 μm (B, C), 5 μm (E, F, P), 3 μm (HJ), 1,5 μm (K), 2 μm (L) e 7 μm (O).