Ligação específica da melatonina a núcleos celulares purificados da glândula mamária de camundongos suíços: variações dia-noite e efeito da luz contínua

Os locais de ligação da melatonina foram caracterizados nos núcleos das glândulas mamárias de camundongo. Verificou-se que a ligação específica de 2-125I-iodomelatonina por homogenatos de núcleos de células da glândula mamária purificados é rápida, reversível e saturável. A ligação de 125I-melatonina exibiu variações diurnas e noturnas com a maior afinidade de ligação observada durante o período escuro e a menor afinidade ao meio-dia. No entanto, quando os animais foram mantidos sob contínua exposição à luz, a ligação da 125I-melatonina aos núcleos das células apresentou afinidade maior do que os valores diurnos encontrados em animais mantidos em fotoperíodo normal. A análise de Scatchard dos dados de ligação revelou a existência de uma variação diurna significativa na cinética de ligação, compatível com a existência de duas classes de locais de ligação: um local de ligação de alta afinidade expresso durante a noite, com KD = 185 +/- 36 pm e uma capacidade de ligação de 6,24 +/- 0,4 fmol / mg de proteína e um local de baixa afinidade com KD = 562 +/- 57 nm e Bmax = 7,56 +/- 0,49 pmol / mg de proteína durante o dia. Curiosamente, após 2 semanas de exposição contínua à luz, os animais mortos em um tempo equivalente do meio-dia mostraram um aumento significativo na afinidade de ligação, com KD = 1,43 +/- 0,2 nm e Bmax = 24,75 +/- 3,5 fmol / mg de proteína. As experiências de deslocamento mostram um valor IC50 compatível com as constantes de afinidade obtidas nas experiências de saturação. Esses resultados indicam que o sítio de ligação de baixa afinidade pode estar saturado pelos altos níveis de melatonina encontrados na glândula mamária de camundongo e sustentam a hipótese de uma regulação circadiana desses sítios de ligação à melatonina pelo fotoperíodo.