Identificação de intermediários C18 formados durante a bio-hidrogenação do ácido estearidônico por microrganismos ruminais in vitro

Incubações em lote in vitro foram utilizadas para estudar a biohidrogenação ruminal de ácidos graxos insaturados. Um estudo anterior usando níveis crescentes de suplementação de ácido estearidônico (18: 4n-3), revelou que a população microbiana ruminal extensivamente bio-hidrogena 18: 4n-3 após 72 h de incubação in vitro, embora vários intermediários formados não tenham sido completamente caracterizados. Portanto, no presente estudo, as amostras foram reanalisadas para identificar os intermediários de biohidrogenação 18: 2, 18: 3 e 18: 4 de 18: 4n-3. A cromatografia gás-líquido acoplada à espectrometria de massa foi utilizada para caracterizar esses intermediários. A espectrometria de massa de ionização química de acetonitrila dos derivados de ésteres metílicos de ácidos graxos permitiu a discriminação de ácidos graxos como intermediários de biohidrogenação não conjugados ou conjugados. Além disso, a espectrometria de massa em tandem de ionização química de aduto covalente de acetonitrila produziu íons proeminentes indicativos da posição de ligação dupla dos principais isômeros 18: 3, ou seja, Δ5,11,15 18: 3. Além disso, os derivados de 4,4-dimetiloxazolina preparados a partir dos ésteres metílicos de ácidos graxos possibilitaram a elucidação da estrutura dos novos intermediários de bio-hidrogenação 18: 2, 18: 3 e 18: 4. Os intermediários acumulados no meio de fermentação após 72 h de incubação de 18: 4n-3 sugerem que, semelhante às vias de biohidrogenação dos ácidos linoléico (18: 2n-6) e α-linolênico (18: 3n-3), a via de o 18: 4n-3 também prossegue com a formação de ácidos graxos conjugados seguido de hidrogenação, embora nenhum dieno conjugado tenha sido encontrado. A formação dos novos intermediários de biohidrogenação de 18: 4n-3 parece seguir um padrão de isomerização incomum com migrações de dupla ligação distintas.