Melatonina

A melatonina reprograma o perfil proteômico na retina exposta à luz in vivo


. 1 de agosto de 2010; 47 (2): 255-60.
doi: 10.1016 / j.ijbiomac.2010.04.013. Epub 2010, 29 de abril.

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Ruonan Zhang et al. Int J Biol Macromol. .

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Resumo

A melatonina, uma pequena molécula orgânica sintetizada pela glândula pineal e pela retina, tem uma variedade de funções fisiológicas, como marcapasso de relógio circadiano e antioxidante. A melatonina retiniana é regulada para baixo pela luz e dificilmente é detectada durante o dia. A ausência de melatonina na retina durante a exposição prolongada à luz pode contribuir para a degeneração retinal induzida pela luz. Procuramos investigar o impacto da melatonina na retina exposta à luz usando abordagens proteômicas. Nós expusemos camundongos à luz (250-300lux) por 12h seguido por 12h de escuridão ou a mesma intensidade de luz contínua por 7 dias. Em metade dos animais expostos à luz contínua, a melatonina foi injetada todas as noites. A análise proteômica da retina desses três grupos de animais mostrou que cinco proteínas proeminentemente reguladas para cima pela luz constante foram reguladas para baixo pelo tratamento com melatonina. Estas cinco proteínas foram identificadas como vimentina, proteína serina / treonina-fosfatase 2A, inibidor de dissociação Rab GDP alfa, proteína de ligação a nucleotídeo guanina G (o) alfa e proteína de ligação a retinaldeído. Essas cinco proteínas são conhecidas por estarem envolvidas em vários processos celulares que podem contribuir para a degeneração retinal induzida pela luz. A identificação das proteínas-alvo da melatonina em nosso estudo fornece uma base para estudos futuros sobre o potencial da melatonina na prevenção ou tratamento da degeneração retinal induzida pela luz.

Declaração de conflito de interesse

Concorrência de interesses Nenhum a declarar.

Figuras

Figura 1
Figura 1

Análise eletroforética bidimensional de proteínas da retina do grupo claro / escuro e do grupo luz constante. As retinas foram isoladas de camundongos que foram expostos a condições cíclicas de 12 horas de luz / 12 horas de escuridão ou condições de luz ambiente constante. Proteínas de duzentos microgramas foram separadas usando uma faixa de gradiente de focalização isoelétrica de 11 cm (pH 5-8) e gel de gradiente pré-moldado de 8-12%. As proteínas foram visualizadas por coloração com azul de Coomassie. As setas mostram manchas com intensidades diferenciais. (A) Proteoma retinal de camundongos expostos à condição de luz / escuridão cíclica; (B) proteoma retinal de camundongos expostos à condição de luz constante.

Figura 2
Figura 2

Sequenciamento de peptídeos usando espectrometria de massa TOF-TOF. Pontos de proteína que foram identificados por MALDI-TOF como Prx 2 e Prx 6 foram posteriormente analisados ​​por espectrometria de massa TOF-TOF. Os peptídeos selecionados foram sequenciados como Prx 2 e Prx 6, respectivamente. Espectros de massa representativos para Prx 2 e Prx 6 são mostrados. X-Axis representa a relação massa para carga (m/a partir de) e E-eixo mostra a intensidade relativa.

Fig. 3
Fig. 3

Análise 2D-SDS-PAGE de proteínas retinais do grupo de luz constante e grupo tratado com melatonina. As retinas foram isoladas de camundongos que foram alojados em condições de luz constante, tratados com ou sem melatonina. As setas mostram pontos de regulação para cima ou para baixo. (A) Proteoma retinal de camundongos expostos à luz constante e tratados com veículo de controle; (B) proteoma retinal de camundongos expostos à luz constante e tratados com melatonina.

Fig. 4
Fig. 4

2D-SDS-PAGE e análise quantitativa das proteínas alvo. (A) Imagens de gel ampliadas com setas mostrando cinco proteínas, reguladas positivamente por luz constante e reguladas negativamente pela melatonina. # 12, vimentina; # 13, serina / treonina-proteína fosfatase 2A; # 14, inibidor alfa da dissociação Rab GDP; # 17, proteína de ligação ao nucleotídeo guanina; # 18, proteína de ligação ao retinaldeído. Painel esquerdo: claro / escuro cíclico; painel do meio: luz constante; painel direito: luz constante e melatonina. (B) Análise semiquantitativa de cinco proteínas. O número indica a intensidade relativa de cada ponto. Os valores são mostrados em média ± DP (n = 3).

Fig. 5
Fig. 5

2D-SDS-PAGE e análise de Western blot. (A) Imagem ampliada de gel 2D corada com azul de Coomassie. As setas representam a vimentina. (B) 100 µg de proteínas retinais foram separadas usando tiras de IPG de 7 cm e gel de SDS-PAGE a 10% e visualizadas por western blot com anticorpo policlonal antivimentina. A seta mostra novas manchas de vimentina induzidas por luz constante. Painel superior: condição de luz / escuridão cíclica; painel do meio: luz constante; painel inferior: luz constante e melatonina.

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