Um ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) simples e específico de alto rendimento para a determinação quantitativa de melatonina em meio de cultura de células

Um ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) simples, específico e de alto rendimento para a determinação quantitativa de melatonina foi desenvolvido para medir diretamente a melatonina em meio de cultura de células com 10% de FBS. Este ensaio adota um anticorpo monoclonal de melatonina comercial e conjugado de melatonina-HRP, de modo que pode ser aplicado em vários laboratórios rapidamente com baixo custo em comparação com kits comerciais de RIA e ELISA. Além disso, o procedimento é muito mais simples, com apenas quatro etapas: 1) incubação da amostra / conjugado, 2) lavagem da placa, 3) reação de cor TMB e 4) leitura dos resultados. Os padrões do ensaio cobrem uma ampla faixa de trabalho de 100 pg / mL a 10 ng / mL. A sensibilidade foi de 68 pg / mL em meio de cultura de células com 10% de FBS e 26 pg / mL em PBS com apenas 25 μL de volume de amostra. A recuperação da melatonina do meio de cultura celular foi de 101,0%. O principal composto de reação cruzada foi o 5-metoxitriptofol (0,1%). Os coeficientes de variação do ensaio, dentro e entre as corridas, variaram entre 6,68% e 15,76% no meio de cultura de células. A linearidade média de uma amostra de meio de cultura de células diluída em série foi de 105% (CV = 5%), variando entre 98% e 111%, y = 5,5263x + 0,0646, R (2) = 0,99. O ensaio permite que pequenos laboratórios de pesquisa e ensino medam com segurança este importante neuro-hormônio.