Preparação e identificação de anticorpos monoclonais antimelatonina

Anticorpos monoclonais antimelatonina (MAbs) de alto título foram preparados acoplando melatonina a albumina de soro bovino com formaldeído e imunizando camundongos BALB / c com injeções intradérmicas multifocais e por fusão de células de baço produtoras de anticorpos de alto título com células de mieloma de origem SP2 / 0 . Cinco MAbs foram selecionados para posterior caracterização como classes e subclasses. Após quatro diluições limitantes sucessivas, os anticorpos foram produzidos por esses cinco clones com altas afinidades variando de 10 (9) a 10 (11) / m. Verificou-se que estes clones eram da subclasse de imunoglobulina Ig G1 e IgG (2b) com cadeia leve kapa. Um estudo sistemático de reações cruzadas com sete compostos (derivados de indol, aromáticos e imidazol) mostrou que o anticorpo tinha alta especificidade para melatonina, baixa reatividade com 6-hidroximelatonina e N-acetil-5-hidroxitriptamina, e nenhuma reatividade detectável com triptamina , l-triptofano, 5-metoxitriptamina e N-acetil-L-triptofano. Os papéis do núcleo indol e da cadeia lateral na determinação das propriedades antigênicas da molécula são discutidos. Um dos MAbs, 4C9D7, foi usado para estabelecer um ensaio imunoabsorvente ligado a enzima competitivo para a detecção de melatonina no sobrenadante.