O extrato de Curcumae Longae Rhizoma suprime a angiogênese via via PI3K/Akt-eNOS-NO induzida por VEGF

Relevância etnofarmacológica: Curcumae Longae Rhizoma (CLR) é um fitoterápico natural seguro e amplamente utilizado há séculos como alimento funcional e produtos de saúde, mas seus efeitos na angiogênese e no mecanismo subjacente relacionado permanecem obscuros.

Objetivo do estudo: A angiogênese anormal está intimamente relacionada com várias doenças e, portanto, o controle preciso da angiogênese é de grande importância. O conhecido fator angiogênico, fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), medeia a angiogênese e induz várias vias de sinalização via ligação ao receptor VEGF (VEGFR). A atenuação das vias de sinalização relacionadas à angiogênese desencadeadas por VEGF pode aliviar várias doenças por meio da supressão da angiogênese. Aqui, pretendemos elucidar que o extrato de CLR poderia exercer atividades anti-angiogênicas marcantes tanto in vitro quanto in vivo.

Materiais e métodos: A viabilidade da célula endotelial vascular umbilical humana (HUVEC) foi examinada por ensaios LDH e MTT. A capacidade migratória e invasiva das células endoteliais foi avaliada independentemente por cicatrização de feridas e ensaios transwell. As atividades do extrato de CLR na angiogênese in vitro foram testadas pelo ensaio de formação de tubos. A vascularização in vivo foi determinada usando o modelo de embrião de zebrafish na presença de extrato de CLR. Western blotting foi aplicado para determinar os níveis fosforilados de VEGFR2, PI3K, AKT e eNOS. Além disso, os níveis de óxido nítrico (NO) e espécies reativas de oxigênio (ROS) foram avaliados separadamente pelo ensaio de Griess e pela reação do diacetato de 2’7′-diclorofluoresceína. Além disso, a capacidade migratória celular da célula cancerígena foi estimada usando células de carcinoma de cólon humano cultivadas (linha celular HT-29) e o ensaio de imunofluorescência foi aplicado para avaliar o efeito do extrato de CLR na translocação nuclear da subunidade NF-κB p65 no Culturas HT-29 tratadas com VEGF.

Resultados: O extrato de CLR suprimiu significativamente uma série de respostas angiogênicas mediadas por VEGF, incluindo proliferação de células endoteliais, migração, invasão e formação de tubos. Além disso, o extrato de CLR reduziu a formação de vasos subintestinais in vivo no modelo de embrião de peixe-zebra. Mecanisticamente, o extrato de CLR atenuou a sinalização desencadeada por VEGF, conforme demonstrado pela diminuição do nível de VEGFR2 fosforilado e subsequentemente inativou seus reguladores a jusante, por exemplo, fosfo-PI3K, fosfo-AKT e fosfo-eNOS. A produção de NO e a formação de ROS foram marcadamente inibidas em HUVECs. Além disso, o extrato de CLR suprimiu a migração celular e a translocação de NF-κB em células HT-29 cultivadas.

Conclusões: Esses achados pré-clínicos demonstram que o extrato de CLR atenua notavelmente a angiogênese e que tem grande potencial como candidato a medicamento natural com excelente atividade antiangiogênica.