Inibição do acúmulo de proteína príon resistente à protease in vitro pela curcumina

A inibição da curcumina da conversão livre de células de ³⁵S-PrP-sen para o estado resistente à protease. (A) Reações de conversão de PrP livre de células entre hamster sírio ³⁵S-PrP-sen e PrP-res foram conforme descrito anteriormente (6), exceto para a presença da concentração indicada de curcumina. Resumidamente, hamster ³⁵S-PrP-sen sem uma âncora de glicofosfatidilinositol (20.000 cpm) foi imunoprecipitado a partir de células de fibroblastos e incubado com PrP-res que foram isolados dos cérebros de hamsters infectados com scrapie 263K e pré-tratados com 2 M de guanidina HCl (6). As condições finais da incubação de conversão foram 300 nM PrP-res, ∼5 nM PrP-sen, 0,5 M de cloridrato de guanidina, 50 mM de citrato de sódio [pH 6.5], Cloreto de cetilpiridínio 1 mM, 0,6% N-lauroil sarcosina e 37 ° C. A formação de ³⁵S-PrP-res (marcado pelo colchete direito) foi detectado tratando 90% dos equivalentes de reação com PK (10 μg / ml) por 1 h a 37 ° C, seguido pela inativação do PK com Pefabloc (Boehringer Mannheim ), precipitação de metanol e análise de SDS-PAGE conforme descrito anteriormente (6). Os 10% restantes da mistura de reação foram analisados ​​sem digestão de PK para mostrar a entrada ³⁵S-PrP (colchete esquerdo). (B) Quantificação da proporção de entrada ³⁵S-PrP-sen convertido para a forma resistente a PK (% conversão). Os valores são médias ± SD (n = 3).