Identificação, localização e expressão de peptídeos LPXRFamida e indução dependente de melatonina de seu mRNA precursor no cérebro de salamandra

A existência de péptidos RFamida com um motivo LPXRFamida C-terminal (X = L ou Q) foi identificada no cérebro de várias espécies de vertebrados. No entanto, a presença de peptídeos LPXRFamida no cérebro da urodele ainda não é conhecida. Neste estudo, clonamos um cDNA que codifica o precursor dos peptídeos LPXRFamida do cérebro de salamandra por uma combinação de amplificação rápida 3 ‘e 5’ das extremidades do cDNA. O precursor do peptídeo LPXRFamida deduzido consistia em 233 resíduos de aminoácidos, codificando quatro possíveis peptídeos LPXRFamida. Todas as sequências peptídicas foram flanqueadas por um sinal de amidação C-terminal de glicina e aminoácido básico em cada extremidade como um local endoproteolítico. As análises de espectrometria de massa detectaram um nonapeptídeo, dois decapeptídeos e um octapeptídeo produzidos a partir do polipeptídeo precursor no cérebro como ligantes endógenos. A hibridização in situ revelou ainda a localização celular do mRNA precursor da salamandra LPXRFamida (nLPXRFa) no núcleo supraquiasmático (SCN) no hipotálamo da salamandra. A imunocitoquímica mostrou um agrupamento de corpos celulares restritos ao SCN e seus terminais na eminência mediana. Para entender o mecanismo regulador da expressão do peptídeo nLPXRFa, analisamos ainda o efeito da melatonina na expressão do mRNA do precursor nLPXRFa. A administração de melatonina a tritões aumentou a expressão do mRNA precursor nLPXRFa no diencéfalo. Estes resultados indicam que o urodele hipotálamo possui peptídeos LPXRFamida e a expressão dos peptídeos LPXRFamida é regulada pela melatonina. A localização de peptídeos nLPXRFa sugere ainda que esses peptídeos podem estar envolvidos na regulação da liberação de hormônio hipofisário em salamandras.