Evidência de ação pró-oxidante e antioxidante da melatonina na linhagem de células hepáticas humanas HepG2

O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade da melatonina medindo seus efeitos em vários alvos celulares. A viabilidade celular, o nível intracelular de glutationa reduzida (GSH) e a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) foram avaliadas na linha celular de fígado humano (HepG2), após incubação com concentrações crescentes de melatonina (0,1-10.000 microM). Os tempos de incubação testados foram 24, 72 e 96 h para viabilidade celular e nível de GSH intracelular e 15 e 45 minutos para produção de ROS. Avaliações de alvos celulares foram possíveis em células vivas por meio de um novo citofluorímetro de microplaca. Esta tecnologia foi adequada para a avaliação da viabilidade celular, nível de GSH e superprodução de ROS com sondas fluorescentes, respectivamente, vermelho neutro, monoclorobimane (mBCl) e 2 ‘, 7’-diclorofluorescina diacetato (DCFH-DA). Nas concentrações mais baixas de melatonina (0,1-10 microM) e por um tempo de incubação relativamente curto (24 h), o efeito antioxidante da melatonina foi revelado por um aumento do nível de GSH intracelular, associado à melhora da viabilidade celular. Em contraste, após uma incubação mais longa (96 h), a viabilidade celular diminuiu significativamente com essas concentrações de melatonina mais baixas (0,1-10 microM). Além disso, altas concentrações de melatonina (1.000-10.000 microM) induziram a depleção de GSH. Este estresse oxidativo está associado à superprodução de ROS de 10 microM após apenas 15 minutos de incubação. Este duplo efeito é uma forte evidência de que, in vitro, a melatonina pode ser antioxidante e pró-oxidante na linhagem de células do fígado humano, dependendo da concentração e do tempo de incubação.