Determinação de melatonina livre e total (livre mais ligada à proteína) no plasma e líquido cefalorraquidiano por cromatografia líquida de alta performance com detecção de fluorescência

É descrito um método simples, sensível e preciso para a estimativa da melatonina (MLT) livre e total (livre mais ligada à proteína) no plasma humano e no líquido cefalorraquidiano (LCR). Por meio de cartuchos Chem-Elut, MLT livre e total (o último obtido após uma etapa de desproteinização) foram quantificados em amostras extraídas com diclorometano e analisados ​​em uma corrida cromatográfica por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) com detecção fluorimétrica. A coluna utilizada foi uma Extrasil ODS-2 (3 microm, 150 x 4,6 mm ID), enquanto a fase móvel consistia em acetato de sódio-acetonitrilo 75 mM (72:28, v / v) (pH 5,0). A repetibilidade e reprodutibilidade do método foram 3,24 e 9,4%, respectivamente. A recuperação de melatonina do plasma e CSF foi de 99,9 +/- 4,0% para amostras não desproteinizadas e 93,2 +/- 4,8% para amostras desproteinizadas. O limite de detecção do ensaio foi de 0,5 pg / ml. No plasma humano, as concentrações médias +/- SD no período de escuridão foram 23,18 +/- 7,44 pg / ml para a melatonina livre e 82,5 +/- 36,48 pg / ml para a melatonina total, enquanto as menores concentrações detectadas durante o dia foram 2,23 + / -2,22 e 7,40 +/- 5,68 pg / ml, respectivamente. A detecção de MLT no LCR foi de 5,01 +/- 2,31 e 28,55 +/- 6,95 pg / ml para a fração livre e total, respectivamente.