Determinação de melatonina em fluidos biológicos na presença do agonista de melatonina S 20098: comparação de técnicas imunológicas e métodos de GC-MS

Os imunoensaios foram investigados para a determinação de melatonina em amostras biológicas na presença de um análogo estrutural naftalênico S 20098, que está atualmente em desenvolvimento como um agonista da melatonina. A falta de especificidade de anticorpos comercialmente disponíveis na presença de moléculas intimamente relacionadas nos levou a desenvolver um procedimento LC-RIA com um limite de quantificação fixado em 15 pg / ml (-1). Como essa técnica não era sensível o suficiente e era difícil de usar rotineiramente, uma técnica de GC-MS mais sensível foi desenvolvida. Este método envolveu extração em fase sólida automatizada (plasma) ou extração líquido-líquido (saliva), derivatização da porção indólica e separação de GC com um dispositivo de comutação automatizado antes da detecção de MS. O método foi validado na faixa de 1-100 pg / ml (-1), com um limite de quantificação definido em 1 pg / ml (-1) em plasma e saliva humanos. A precisão e exatidão intra-ensaio e inter-ensaio estavam dentro de 16% para todas as concentrações investigadas e cada matriz biológica. A estabilidade da melatonina no plasma e saliva sob várias condições de armazenamento também foi determinada. Foi demonstrada a especificidade do ensaio para a análise da melatonina na presença de S 20098 e seus metabólitos. O método foi subsequentemente aplicado para a determinação das concentrações endógenas de melatonina em amostras de plasma e saliva de estudos clínicos realizados com S 20098 para fornecer dados farmacodinâmicos.