Desenvolvimento e validação de um radioimunoensaio de melatonina usando melatonina radioiodada como marcador

Um novo radioimunoensaio (RIA) usando [125I]-melatonina como marcador para determinação de melatonina em fluidos biológicos foi desenvolvida. Os anti-soros de melatonina foram produzidos em coelhos por imunização com conjugado de tireoglobulina bovina de N-acetil-5-metoxitriptofano. Foram obtidos dois anti-soros de alta afinidade e específicos. Ao contrário de estudos anteriores, a melatonina foi radioiodada diretamente. Iodo-Gen foi usado como oxidante. A melatonina radioiodada foi purificada por TLC para uso em RIA. A melatonina foi extraída de amostras de plasma, soro e urina (1 ml) com clorofórmio. Usando a extração, a sensibilidade do método RIA foi de 18 fmol / ml da amostra original. Extratos de plasma, soro e urina diluídos paralelamente com melatonina sintética em RIA. A análise de HPLC de extratos de plasma e soro mostrou apenas um pico imunorreativo coeluindo com melatonina sintética. Maioria da imunorreatividade da urina coeluída com melatonina sintética, mas 7 a 23% de imunorreatividade contaminante também foi observada. Os valores diurnos para plasma de rato, soro humano e melatonina urinária foram 30-60, 20-40 e 50-130 fmol / ml e os respectivos valores noturnos foram 160-300, 180-370 e 230-470 fmol / ml. Assim, um ritmo diurno característico de melatonina foi observado em todos os casos. A excreção urinária de melatonina imunorreativa durante o dia foi 3-9 e durante a noite 11-28 pmol / h. Assim, desenvolvemos um método de RIA específico e válido para a determinação de melatonina plasmática e sérica. Apesar da especificidade incompleta do RIA para determinações de urina, foi observado um ritmo diurno claro para melatonina na urina. A vantagem distinta da utilização de [125I]a melatonina como traçador é que a contagem de cintilação onerosa e incômoda pode ser evitada.