Descoberta de agonistas dos β 2-adrenoceptores em Curcuma zedoaria Rosc usando ensaio fenotípico de células sem rótulo combinado com cromatografia líquida bidimensional

Os medicamentos tradicionais chineses (TCMs) têm sido amplamente usados ​​na prática clínica e fornecem uma fonte rica para a descoberta de novas pistas de medicamentos. No entanto, a identificação eficiente de moléculas ativas responsáveis ​​pelos efeitos terapêuticos de TCMs complexos ainda é um grande desafio. Aqui, combinamos o ensaio fenotípico de células livres de marcadores com cromatografia líquida bidimensional (2DLC) para identificar o potencial β₂-adrenoceptor (β₂-AR) agonistas relacionados ao efeito antiasmático de Curcuma zedoaria Rosc (C.zedoaria), um TCM comumente usado. O extrato de acetato de etila de C.zedoaria foi primeiro fracionado em 26 frações. O perfil fenotípico de células sem rótulo foi então usado para localizar os locais ativos. A separação ortogonal de segunda dimensão (D2) foi realizada em duas frações exibindo efeito agonístico no β₂-AR, combinado com a triagem das frações D2 para rastrear a atividade. Finalmente, esta abordagem levou ao isolamento de três diarilheptanoides conhecidos, entre os quais o diarilheptanoide b exibiu a atividade agonística mais potente com um EC₅₀ valor de 5,93 μM. Esse resultado foi posteriormente demonstrado por meio da síntese química de diarilheptanoide b. É a primeira vez que descobrimos que os diarilheptanóides podem ativar o β₂-AR, que pode ser responsável pelo efeito antiasmático de C.zedoaria observado tradicionalmente e em aplicação clínica. Este estudo também demonstra o potencial desta estratégia integrada para identificar ingredientes ativos e determinar a base de materiais terapêuticos em TCMs complexos.