Atividade citotóxica de Curcuma zedoaria por meio da ativação mitocondrial em células de câncer de ovário

26 de março de 2021 Agora

. 31 de dezembro de 2013; 29 (4): 257-61.

doi: 10.5487 / TR.2013.29.4.257.

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Yujin Shin et al. Toxicol Res. 2013.

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Resumo

O α-curcumeno é um dos componentes fisiologicamente ativos da Curcuma zedoaria, que se acredita realizar atividades antitumorais, cujos mecanismos são pouco conhecidos. No presente estudo, investigamos o mecanismo do efeito apoptótico do α-curcumeno no crescimento do câncer humano humano, células SiHa. Após o tratamento com α-curcumeno, a viabilidade celular das células SiHa foi inibida> 73% por 48 h de incubação. O tratamento com α-Curcumene mostrou um padrão de fragmentação de DNA nucleossômico característico e a porcentagem de células sub-diplóides aumentou de maneira dependente da concentração, características marcantes da apoptose. A ativação do citocromo c mitocondrial e um ensaio in vitro da atividade da caspase-3 demonstraram que a ativação das caspases acompanha o efeito apoptótico do α-curcumeno, que medeia a morte celular. Esses resultados sugerem que o efeito apoptótico do α-curcumeno nas células SiHa pode convergir a ativação da caspase-3 através da liberação do citocromo c mitocondrial.

Palavras-chave: Atividade citotóxica; Ativação mitocondrial; células cancerosas ovarianas; α-Curcumene.

Figuras

Figura 1. — Fig. 1 .. Diminuição da viabilidade celular por α-curcumeno em células SiHa. Após o tratamento de α-curcumeno por 24 horas e 48 horas, a viabilidade celular foi avaliada por coloração com MTT. Os resultados são expressos como a alteração percentual da condição de controle em que as células foram cultivadas no meio sem droga. Os pontos de dados representam os valores médios de quatro repetições com as barras indicando sem

Figura 2. — Fig. 2 .. Efeito de α-curcumene na fragmentação de DNA de células SiHa. (A) Células SiHa foram tratadas com cada concentração de α-curcumeno por 24 horas. Pista M: marcador de DNA; pista 1: controle; pista 2: 100 μM; pista 3: 200 μM; pista 4: 300 μM; pista 5: 400μM de α-curcumeno. (B) Quantificação da fragmentação de DNA por [³H]incorporação de -timidina. As datas foram apresentadas como porcentagem de contagens por minuto (cpm) de DNA fragmentado em comparação com o cpm total. A data representa os valores médios de quatro repetições com barras indicando SEM. * p <0,05 comparado ao controle.

Fig. 3. — Fig. 3 .. A porcentagem de células sub-diplóides por análise de citometria de fluxo após o tratamento com 0 a 400 μM de α-curcumeno em células SiHa por 24 horas. As células foram coradas com PI e o número de células sub-diplóides foi combatido usando citometria de fluxo FACScan. Células com conteúdo de DNA subdiplóide (> 5% de G₀ conteúdo) foram considerados apoptóticos. A distribuição do ciclo celular foi analisada com ModiFitLT V 2.0. Os dados representam os valores médios de três repetições, com barras indicando sem * p <0,05 em comparação com o controle.

Fig. 4. — Fig. 4 .. Indução da liberação de citocromo c e atividade da caspase-3 por α-curcumeno. As células SiHa foram tratadas com cada concentração de α-curcumene durante 24 horas. (A) Citocromo mitocondrial c foi detectado por anticorpo monoclonal anti-citocromo c. O citocromo agregado c, Curvas de proteína X foram usadas para normalizar o carregamento de proteína. (B) A atividade da caspase-3 foi medida lendo amostras em um leitor de microplaca de fluorescência. Os dados representam a atividade relativa da caspase-3 após a normalização com quantidades de proteína. Os dados indicam valores médios de três repetições, com barras indicando sem * p <0,05 em comparação com o controle.

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