A curcumina é um inibidor redox de APE1 e exibe uma atividade antiviral contra a replicação e patogênese do KSHV
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Antiviral Res. Julho de 2019.
Artigo PMC grátisResumo
A curcumina, um polifenol, é o principal composto bioativo no açafrão-da-índia dietética, curcuma longa. Possui propriedades antiinflamatórias, antioxidantes e antineoplásicas e mostra potencial no tratamento ou prevenção de doenças específicas, como condições oxidativas e inflamatórias, síndrome metabólica, artrite, ansiedade, hiperlipidemia e câncer. A gama diversificada e os potenciais efeitos benéficos para a saúde geraram entusiasmo, levando a uma investigação intensiva sobre o fitoquímico. No entanto, também foi levantada uma preocupação se a curcumina tem um perfil de bioensaio promíscuo e é um composto de interferência Pan-Assay (PAINS). Aqui, apresentamos evidências indicando que a curcumina não é uma DOR, mas um inibidor da função redox de APE1 que afeta muitos genes e vias. Esta descoberta explica a ampla gama de efeitos da curcumina em diversas doenças humanas e prevê uma aplicação potencial no tratamento de infecção viral e câncer associado a vírus. Como prova de conceito, demonstramos que a curcumina é capaz de bloquear com eficiência a replicação do herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi e inibir os processos patogênicos de angiogênese e invasão celular.
Copyright © 2019. Publicado por Elsevier BV
Declaração de conflito de interesse
Conflito de interesses
Os autores declaram não haver conflito de interesses com o conteúdo deste artigo.
Figuras
(A) Um ensaio baseado em EMSA para a atividade redox de APE1 foi estabelecido com proteínas AP-1 purificadas (c-Jun e c-Fos) e APE-1. Um DNA de fita dupla carregando um motivo de ligação de AP-1 foi misturado com extrato nuclear ou c-jun / c-fos purificado (proporção de 1: 1). APE1 purificado ou APE1 reduzido (tratado com DTT 0,25 mM) foram adicionados à reação. A ligação de AP-1-DNA foi examinada por EMSA. Extrato nuclear e APE1 reduzido resultaram em bandas deslocadas enquanto APE1 oxidado (tratado com H2O2) não suportou a ligação ao DNA de AP-1. (B) Concentrações crescentes de curcumina foram adicionadas à reação e os efeitos delas nas atividades redox foram medidos por meio de EMSA.
As células 293 T foram transfectadas com o promotor AP-1-luciferase (A) ou plasmídeos repórter da luciferase do promotor NF-κB (B), seguido de indução com TPA. A curcumina em concentrações crescentes foi adicionada 6 h após a indução. As atividades do promotor foram medidas através do ensaio da luciferase após 24 h (C). As células T 293 também foram co-transfectadas com o promotor NF-κB-repórter da luciferase e o vetor de expressão EBV LMP1. Curcumina em diferentes concentrações foi adicionada 6h pós-transfecção e os ensaios de luciferase foram realizados através do ensaio de luciferase após 24 h.
As células BCBL-1 foram tratadas com uma ampla gama de concentrações de curcumina 3 h após serem induzidas por TPA para replicação lítica viral. (A) Extratos de células inteiras foram preparados 48 h após a indução e submetidos a análise de Western blot com anticorpos monoclonais anti-RTA e anti-K8. (B) O DNA total foi purificado 48 horas após a indução e a replicação do DNA de KSHV intracelular foi determinada usando PCR quantitativo em tempo real (azul). Cinco dias após a indução, os meios de cultura de células foram coletados e os vírions extracelulares (verdes) foram determinados conforme descrito em Materiais e Métodos (verde). Células BCBL-1 não induzidas foram tratadas com curcumina por 120 he citotoxicidade celular (laranja) foi avaliada pelo procedimento de coloração com azul de Tripan usando um instrumento Countstar. Os valores médios de três experiências independentes e desvios padrão são apresentados no eixo y das curvas de resposta à dose. IC50, EC50 e CC50 são calculados usando o software GraphPad Prism.
(A) Células-tronco do ligamento periodontal (PDLSCs) foram infectadas com KSHV em um MOI de 50 (equivalente de DNA genômico viral) na ausência e presença de curcumina, conforme indicado. A infecciosidade mostrou ser de 92% e 97%, respectivamente pela expressão de GFP. (B) PDLSCs não infectados e infectados com KSHV foram aplicados em Matrigel para examinar a capacidade de formação de túbulos. PDLSCs infectados com KSHV foram colocados em Matrigel na presença de curcumina 20 μM. A tubulogênese foi examinada ao microscópio e quantificada pela medição do comprimento total do tubo usando o software Image J. (C) PDLSCs ou KSHV-PDLSCs (1,5 × 104 células / poço) foram semeados na câmara superior de Transwell com uma camada de Matrigel. As células migradas para a câmara inferior foram coradas com violeta de cristal. PDLSCs infectados com KSHV foram tratados com curcumina 20 μM e o efeito da curcumina na invasão celular foi avaliado por contagem de células migradas na câmara inferior. A quantificação do ensaio de invasão transwell foi realizada pelo software Image J por contagem de vários campos visuais microscópicos selecionados aleatoriamente.
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