Regulação negativa dos receptores de melatonina mt1 em ovário de rato após exposição a estrogênio

Neste estudo, demonstramos que 2-[125I]-iodomelatonina liga-se especificamente às membranas das células da granulosa ovariana de rato (GC) com alta afinidade (KD = 83 pM; Bmax = 3,28 fmol / mg de proteína). Usando a análise de imunoblot e um anticorpo anti-receptor de melatonina mt1, também detectamos receptores de melatonina mt1 em ovário de rato. Como foi relatado que a melatonina altera as respostas esteroidogênicas dos tecidos ovarianos às gonadotrofinas, pode haver um papel fisiológico para a melatonina intra-ovariana. Assim, a fim de investigar um possível papel intra-ovariano para a melatonina, usamos um modelo de desenvolvimento folicular in vivo e in vitro. O tratamento de ratas imaturas (dia 21) com estradiol (E; 0,2 mg / dx 3 d; subcutâneo) foi usado para induzir o crescimento folicular. Membranas de ovários de animais não tratados (U) e tratados com E continham alta afinidade 2-[125I]locais de ligação de -iodomelatonina (I-MEL) (Kd = 83 e 23 pM, respectivamente). O tratamento com estradiol in vivo causou uma diminuição significativa (P <0,05) na ligação de 2-[125I]-iodomelatonina para as membranas ováricas com ovários de animais não tratados com Bmax = 3,28 fmol / mg de proteína vs. ovários de animais tratados com estradiol com Bmax = 0,92 fmol / mg de proteína. Além disso, após o tratamento com estradiol, os receptores de melatonina mt1 em ovário de rato foram regulados negativamente (aproximadamente 95%) usando análise de imunotransferência. As células da granulosa isoladas de ratos tratados com E foram posteriormente maturadas in vitro com testosterona (T) e o hormônio folículo estimulante da gonadotrofina pituitária (FSH). As células da granulosa foram cultivadas com T (10 ng / ml) ou FSH (5,71 ng de FSH-20 / ml ovino) sozinho, ou ambos FSH e T por 48 h. Não houve ligação específica estatisticamente significativa de 2-[125I]-iodomelatonina para membranas GC cultivadas com T ou FSH sozinho. No entanto, após uma exposição de 48 horas ao FSH e T in vitro específico 2-[125I]-iodomelatonina ligação ocorreu com total de 2-[125I]ligação -iodomelatonina = 3,15 [corrected] fmol / mg de proteína. Portanto, a existência de expressão regulada por hormônios de locais de ligação de melatonina de alta afinidade sugere que a melatonina pode ter um importante papel fisiológico intra-ovariano.