Determinação de melatonina em plasma humano com extração em fase sólida, cromatografia líquida de alto desempenho e detecção de fluorescência

Um novo método bioanalítico para a determinação de melatonina em plasma com cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e detecção de fluorescência precedida por extração em fase sólida foi desenvolvido e validado. A melatonina foi extraída de 3 mL de plasma usando um cartucho de extração de fase sólida Waters Oasis HLB e o eluto foi evaporado até a secura e dissolvido em fase móvel de 200 microl; tampão acetonitrila-fosfato, 0,01 M pH 7,2 (25:75, v / v). 125 microL foram injetados no sistema de HPLC e a separação foi realizada em uma coluna Waters SymmetryShield RP18 de 5 mícrons (250 x 4,6 mm). Os comprimentos de onda de excitação e emissão foram fixados em 285 nm e 345 nm, respectivamente. O sistema de HPLC foi capaz de separar a melatonina e o padrão interno (5-fluorotriptamina) de outros compostos de indol endógenos, como a serotonina e o triptofano. Foi possível determinar até 0,10 nmol / L, com uma precisão intra-ensaio de cerca de 13%. A melatonina foi estável no plasma por pelo menos 30 dias a cerca de 23 graus C.