Caracterização de locais de ligação de melatonina de alta afinidade em núcleos de células purificadas de fígado de rato

Os locais de ligação de 2-125I-iodomelatonina de alta afinidade em homogenatos de núcleos de células purificadas de fígado de rato foram localizados e caracterizados usando técnicas de ligação bioquímica. A ligação nesses locais foi considerada rápida, reversível, saturável e demonstrou seletividade farmacológica. A 0 graus C, a ligação atingiu o equilíbrio em cerca de 10 min. A análise de Scatchard dos dados em equilíbrio revelou uma única classe de sítios de ligação com uma constante de dissociação de KD = 190 +/- 47 pM, Bmax = 9,8 +/- 0,6 fmol / mg de proteína e um coeficiente de Hill de nH = 1,02 + / – 0,034. A análise cinética das curvas de associação e dissociação indicou um KD cinético = 148 +/- 41 pM, que está em boa concordância com o valor obtido no equilíbrio. A ligação específica de 2-125I-iodomelatonina (45 pM) (0,51 +/- 0,04 fmol / mg de proteína) foi significativamente melhorada (0,79 +/- 0,04 fmol / mg de proteína) quando os homogenatos de núcleos de células hepáticas purificadas foram pré-incubados com DNase (2 microgramas / ml a 37 graus C por 20 min) antes de ser usado em experimentos de ligação. Após a adição de proteinase K ou ácido tricloroacético a homogenatos nucleares de células purificadas tratadas com DNase, a ligação específica desapareceu. Isto sugere que a ligação específica de 2-125I-iodomelatonina nos núcleos das células do fígado está associada à proteína nuclear. Experimentos de competição mostram que N-acetil-serotonina (Ki = 81,3 nM) foi mais potente do que 5-hidroxitriptamina (Ki> 1 microM) e 5-metoxitriptamina (Ki >> 10 microM) na inibição da ligação de 2-125I-iodomelatonina (Ki melatonina = 146 pM). Estes dados indicam que existem locais de ligação específicos de 2-125I-iodomelatonina nos núcleos das células do fígado de rato e que podem compreender um locus para a ação intracelular da melatonina. A correlação entre os valores de KD e Bmax com as concentrações de melatonina no núcleo sugere que esses sítios de ligação podem ser um receptor fisiológico de melatonina, o que poderia explicar os efeitos genômicos descritos do hormônio pineal.