Alterações na ligação da iodomelatonina às membranas das células de Leydig e esteroidogênese após exposição prolongada in vitro à melatonina

O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos da exposição prolongada à melatonina (MLT) na ligação da iodomelatonina às membranas de células de Leydig de rato e a subsequente modulação da secreção de testosterona e monofosfato de adenocina cíclica (cAMP) dessas células pelo próprio MLT . As células de Leydig foram purificadas por Percoll a partir de ratos adultos e cultivadas in vitro com MLT (1–100 nmol / L) durante 16 h. Ensaios de ligação com 2 (125I) iodomelatonina foram então realizados; além disso, a secreção de testosterona e AMPc durante um desafio agudo com hormônio lutenizante (LH) (20 mIU / mL por 3 h) foi testada por RIA. Como resultado da administração prolongada de MLT, foi observada uma diminuição na densidade de ligação máxima (Bmax) e na constante de dissociação de equilíbrio (Kd) da ligação de 2 (125I) iodomelatonina a membranas celulares purificadas. Maior secreção de testosterona e cAMP durante o desafio com LH foram registrados em células pré-incubadas com MLT; não obstante, o efeito inibitório da administração aguda de MLT nas secreções desafiadas com LH não foi apenas retido, mas também reforçado, uma vez que o IC50 foi 30% menor nas células pré-tratadas com a maior concentração de MLT (100 nM). A administração de cicloheximida (10 µg / mL por 16 h) não evitou a hipersensibilização ao desafio de LH ou à administração aguda de MLT ao desafio de LH. A toxina da coqueluche (180 ng / mL por 16 h) evitou a hipersensibilização ao LH, mas não à administração aguda de MLT. A administração de forskolina (10 nmol / L) aboliu ambos os fenômenos. Em conclusão, a exposição prolongada ao MLT modula a secreção de testosterona por células de Leydig de rato em cultura. Embora os receptores de MLT tenham sido reduzidos, hipersensibilização ao desafio de LH e à administração aguda de MLT no desafio de LH foi observada com a concentração mais alta de MLT. A redução do cAMP intracelular como resultado da administração prolongada de MLT pode ser a causa primária de ambos os fenômenos. Por um lado, o cAMP reduzido pode iniciar o rearranjo das proteínas G e, assim, a sensibilização de adenilato ciclase dependente de LH. Por outro lado, o cAMP reduzido pode tornar as células de Leydig mais responsivas ao próprio MLT por meio de um mecanismo que não envolve o rearranjo da proteína G.