A purificação e caracterização da 6-sulfatoximelatonina biológica e comparação com a 6-sulfatoximelatonina sintética

Purificamos o principal metabólito da melatonina, 6-sulfatoximelatonina, da urina e o comparamos com sua contraparte sintética. Para a preparação do material biológico, a melatonina oral foi administrada a voluntários humanos e sua urina extraída em resina Amberlite XAD-2 para remoção de uréia; os metabólitos glucuronídeos da melatonina foram removidos por cromatografia em sílica; e a 6-sulfatoximelatonina foi separada do sulfato de N-acetil serotonina, o outro sulfato metabólito da melatonina, por cromatografia preparativa em camada fina. A 6-sulfatoximelatonina sintética foi produzida pela reação de 6-hidroximelatonina com ácido clorossulfônico em dimetilformamida; a mistura de reação foi purificada em Florisil e cromatografia em camada fina preparativa foi usada para remover subprodutos indólicos da reação. A microanálise elementar e de raios-X dos produtos biológicos e sintéticos mostrou que os métodos clássicos usados ​​para sua purificação introduziam impurezas inorgânicas, como compostos contendo silício e cloro, que não eram detectáveis ​​por cromatografia de camada fina, espectroscopia de infravermelho, ressonância magnética nuclear espectroscopia ou cromatografia gasosa-espectrometria de massa. Introduzimos outras etapas de purificação para remover essas impurezas inorgânicas, monitorando o processo usando microanálise elementar e de raios-X. A caracterização extensiva dos produtos purificados resultantes mostrou que os compostos biológicos e sintéticos eram idênticos.