A geração de uma matriz de modelos celulares clonais imortalizados do hipotálamo de rato: análise dos efeitos da melatonina nos neurônios do hormônio inibidor da gonadotrofina e kisspeptina

Informações significativas sobre a função reprodutiva foram geradas com base no modelo do rato, incluindo muitas descobertas seminais. Ainda assim, pouco se sabe sobre os eventos moleculares e celulares envolvidos no controle da função reprodutiva, principalmente devido à falta generalizada de modelos celulares de ratos. Portanto, geramos uma grande variedade de linhas celulares usando cultura de células primárias do hipotálamo de rato. A imortalização das células primárias foi alcançada por meio da transferência retroviral do antígeno T, seguida pela seleção com geneticina. As populações de células mistas foram subclonadas e cada linha celular clonal foi analisada quanto à expressão de marcadores celulares específicos. Cada linha possui um perfil fenotípico distinto, com expressão dos principais marcadores neuroendócrinos. Analisamos funcionalmente duas linhas celulares clonais, rHypoE-7 e rHypoE-8, para hormônios implicados no controle da função neuronal do hormônio liberador de gonadotrofina por meio da melatonina, especificamente a kisspeptina (KISS) e o peptídeo 3 relacionado à amida RF (RFRP- 3, o ortólogo de mamífero do hormônio inibidor da gonadotrofina aviária, GnIH). Detectamos a atividade do receptor de melatonina funcional, uma vez que cada linha celular exibiu inibição da acumulação de monofosfato de adenosina cíclica 3′-5′-estimulada por forscolina (cAMP). Após o tratamento com melatonina 10 nM, descobrimos que a expressão do gene KISS foi diminuída na linha celular rHypoE-8, enquanto RFRP-3 foi aumentada na linha celular rHypoE-7. Esses resultados estão de acordo com as funções regulatórias diferenciais desses dois peptídeos, particularmente no controle neuronal de GnRH. Essas linhagens celulares servirão como novas ferramentas para a análise dos mecanismos celulares e moleculares envolvidos no controle hipotalâmico de uma série de processos fisiológicos descritos no modelo animal de rato.