Triagem baseada em espectrometria de massa para inibidores da agregação de proteína beta-amilóide

A doença de Alzheimer é a causa mais comum de perda da função cognitiva entre os idosos, e a agregação e deposição de proteína beta-amilóide mal dobrada (Abeta) contribuem para esse declínio progressivo do sistema nervoso central. Portanto, os compostos que inibem ou mesmo revertem a agregação Abeta podem ser úteis para o tratamento ou prevenção da doença de Alzheimer. Para identificar potenciais agentes terapêuticos para o tratamento da doença de Alzheimer, um ensaio de triagem baseado em espectrometria de massa foi desenvolvido para identificar e classificar os compostos que inibem a agregação de Abeta. Para realizar este ensaio, Abeta foi incubado com um composto de teste a 37 graus C por 20 h seguido por ultrafiltração para separar o Abeta monomérico de seus agregados. Alíquotas do ultrafiltrado foram analisadas para Abeta monomérico usando espectrometria de massa de eletrospray de íon positivo com base na abundância da molécula protonada quádruplamente de Abeta em m / z 1083. A curva de calibração para Abeta foi linear com um coeficiente de correlação (r2) de> 0,99 sobre o intervalo de pelo menos 11-110 microM. O limite de detecção foi de 0,224 ng (5,18 nM, injeção de 10 microL) e o limite de quantificação foi de 0,747 ng (17,2 nM, injeção de 10 microL). Com base em relatórios anteriores de compostos que se ligam a Abeta ou são úteis no tratamento da doença de Alzheimer, melatonina, metisticina, ácido 3-indolepropiônico e daunomicina foram avaliados e classificados em ordem de inibição da agregação de Abeta. O inibidor mais eficaz da agregação da proteína Abeta foi a daunomicina seguida em ordem decrescente pelo ácido 3-indolepropiônico, melatonina e depois metisticina. Estes dados sugerem que este ensaio de triagem LC-MS de ultrafiltração pode ser usado para identificar potenciais agentes terapêuticos para o tratamento da doença de Alzheimer com base na prevenção da agregação Abeta.