Receptores quiméricos e com mutação pontual revelam que um único resíduo de glicina no domínio transmembranar 6 é crítico para a ligação de melatonina de alta afinidade

Para delinear os domínios dos receptores de melatonina de alta afinidade que são essenciais para a ligação da melatonina, geramos quimeras entre o receptor de melatonina Mel1a humano e o receptor H9 órfão relacionado à melatonina. O último receptor não apresenta ligação à melatonina de alta afinidade. Os receptores quiméricos foram expressos transitoriamente em células COS-7 e analisados ​​por ligação de radioligando usando 2-[126I]iodomelatonina ([125I]Mel). A substituição de domínios transmembranares individuais (TMs) do receptor Mel1a pelas hélices H9 correspondentes revelou que TM6 desempenha um papel crítico na ligação do ligante. A substituição de H9-TM6 no receptor Mel1a aboliu qualquer [125I]Ligação de Mel, enquanto as TMs restantes podem ser prontamente trocadas sem afetar a ligação do ligante. A mutagênese dirigida ao local subsequente mostrou que a glicina 20 em TM6 do receptor Mel1a ocupa uma posição importante no local de ligação. Assim, a mutação da glicina 20 em treonina, o resíduo H9 correspondente, reduziu severamente a afinidade do receptor pela melatonina. Além disso, a dupla mutação da alanina 14 para cisteína e da glicina 20 para treonina no TM6 eliminou completamente a alta afinidade [125I]Encadernação de mel. Isso sugere fortemente que as modificações moleculares em TM6 que envolvem glicina 20 levam a incompatibilidades estéricas no bolso de ligação que proíbe a ligação de melatonina de alta afinidade.