Quantificação simultânea de 6 ‑ sulfatoximelatonina e 8 ‑ hidroxi ‑ 2’‑ desoxiguanosina urinária usando espectrometria de massa em tandem de cromatografia líquida

O estresse oxidativo está envolvido na fisiopatologia de muitas doenças e do envelhecimento natural. A 8-hidroxi-2′-desoxiguanosina (8-OHdG) urinária, um produto estável do dano oxidativo do DNA, tem sido amplamente usada como biomarcador de estresse oxidativo. No entanto, apenas relatar o nível de 8-OHdG, como comumente feito anteriormente, não leva em consideração as moléculas de DNA danificadas que não foram reparadas e excretadas na urina. A melatonina é conhecida por ajudar nos reparos do DNA e, portanto, pode modificar os níveis de 8-OHdG. A 6 ‑ sulfatoximelatonina (aMT6s) é o principal metabólito da melatonina excretada na urina. Portanto, é útil medir o 8-OHdG urinário e o aMT6s juntos. Aqui nós descrevemos um método recentemente desenvolvido e validado para medir simultaneamente esses dois compostos usando cromatografia líquida de alta performance-espectrometria de massa em tandem. Usando uma extração líquido-líquido (20% de metanol) em um pH ~ 7, ao contrário de uma extração em fase sólida usada anteriormente, acelerou substancialmente o processo de pré-tratamento da amostra. As curvas de calibração mostraram uma faixa linear de 0,5 a 100 ng / mL para aMT6s com um R² de 0,9999 e de 1,5 a 100 ng / mL para 8-OHdG com R² de 0,9985. A recuperação para 8-OHdG e aMT6s foi de 102 ± 2% e 88 ± 4%, respectivamente. Os limites de detecção foram 0,1 ng / mL para aMT6s e 0,5 ng / mL para 8-OHdG, enquanto os limites inferiores de quantificação foram 0,3 ng / mL para aMT6s e 1,0 ng / mL para 8-OHdG. Para ambos os compostos, o desvio padrão do tempo de retenção foi de 0,03 min, e a variabilidade inter-dia e intradiário, expressa como desvio padrão relativo (RSD), variou de 4,5% -15,8%. O novo método foi aplicado com sucesso para analisar os dois compostos na primeira urina da manhã e ao meio-dia de cinco voluntários. Os resultados confirmam que este método é capaz de medir de forma rápida e precisa o 8-OHdG e o aMT6s urinários simultaneamente. Espera-se que esse novo método tenha importantes aplicações em estudos biomédicos e de saúde ambiental envolvendo a via fisiopatológica do estresse oxidativo.