Otimização de um método de extração para a determinação de prostaglandina E2 em plasma usando planejamento experimental e cromatografia líquida espectrometria de massa em tandem

Um novo método de extração foi desenvolvido para a extração de prostaglandina E (2) (PGE (2)) do plasma humano de pacientes que sofrem de doenças inflamatórias crônicas. Os solventes de extração foram otimizados de forma sistemática e simultânea usando um projeto composto central. O método otimizado envolve a precipitação da fração de proteína, centrifugação, evaporação e dissolução do sobrenadante na fase móvel, triagem para confirmar a presença do analito e quantificação das amostras positivas por cromatografia líquida em tandem espectrometria de massa com armadilha iônica. A espectrometria de massa em tandem no modo negativo foi realizada isolando e fragmentando o íon [PGE(2)-H](-) sinal m / z 351. A identificação e quantificação foram realizadas extraindo os cromatogramas do fragmento de íon em 333, 315 e 271 m / z. A determinação quantitativa foi linear para o intervalo estudado de nanogramas baixo (1-50 ng / ml) e picograma superior (400-1000 pg / ml), utilizando 15 e 0,5 ng / ml de padrão interno, respectivamente. O limite inferior de detecção foi de 2,5 pg para um volume de injeção de 25 microl. O método de extração otimizado apresentou alta reprodutibilidade (coeficientes de variação <4%) e valores de recuperação, estimados a partir de experimentos de adição padrão, variando de 96 a 98%.