O RNA do receptor de melatonina é expresso em fotorreceptores e exibe um ritmo diurno na retina de Xenopus

A melatonina é um sinal de saída de um relógio circadiano endógeno de fotorreceptores retinais, com níveis mais altos ocorrendo à noite. A melatonina sintetizada na retina parece atuar como um sinal parácrino ligando-se a receptores específicos no olho. Demonstramos anteriormente que o RNA que codifica os subtipos de receptor de melatonina Mel (1b) e Mel (1c) é expresso na retina de Xenopus laevis. O objetivo deste estudo foi determinar a distribuição da expressão de RNA do subtipo de receptor Mel (1b) e Mel (1c) na retina e determinar se o nível de expressão desses receptores exibe um ritmo diurno. Seções de retina neural de sapo foram analisadas por hibridização in situ com ribossondas Xenopus Mel (1c) e Mel (1b) marcadas com 35S. A hibridização estava presente nas células da camada nuclear interna e da camada de células ganglionares. Além disso, houve hibridização nos fotorreceptores, o que não foi relatado anteriormente. Para testar a hipótese de que o mRNA do receptor de melatonina da retina sofre um ritmo diurno de expressão, o RNA total foi isolado de retinas neurais de sapo obtidas em intervalos de 3 h durante um período de 24 h. O RNA total foi usado em ensaios de PCR em tempo real para quantificar as diferenças na expressão do mRNA do receptor de Mel (1b) e Mel (1c) em vários momentos circadianos. Tanto o RNA do receptor Mel (1b) quanto o Mel (1c) demonstraram um ritmo de expressão diurno, com níveis de pico ocorrendo no final do período de luz e níveis mais baixos no final do período escuro. Esses resultados apóiam a hipótese de que os receptores de melatonina que codificam o RNA sofrem um ritmo diurno de expressão. Para investigar a possível expressão do subtipo de receptor Mel (1a) na retina de Xenopus, geramos produtos de PCR Mel (1a) em DNA genômico e em RNA de retina neural transcrita reversamente e epitélio pigmentar retinal (RPE). A identidade do produto de PCR foi confirmada por sequenciação. Portanto, todos os três subtipos de receptores de melatonina Xenopus conhecidos parecem ser expressos na retina neural e no EPR.