Ensaios in vitro simples para identificar bloqueadores de agregação beta-amilóide para terapia da doença de Alzheimer

Os compostos que inibem o acúmulo de depósitos de beta-amilóide (Abeta) no cérebro da doença de Alzheimer (DA) são agentes terapêuticos potenciais. Aqui, relatamos o desenvolvimento de dois ensaios simples de triagem in vitro para identificar tais agentes. Usamos esses ensaios para avaliar a potência relativa de alguns possíveis candidatos. Um ensaio é baseado na ligação de Abeta marcado com fluorescência {1-42} a Abeta sintético {1-42} plaqueado em poços de microplacas fluorescentes de parede preta. Soluções de Abeta {1-42} marcadas com fluorescência com e sem bloqueadores são então adicionadas às placas e a quantidade de fluorescência ligada é medida. Outro é um ensaio de tipo de tecido, onde seções de cérebros de camundongos transgênicos modelo AD ou AD não fixados são montadas em lâminas de vidro. As mesmas soluções testadas no teste de microplaca são então adicionadas às seções de tecido. A ligação de Abeta marcado com fluorescência {1-42} aos depósitos de Abeta em AD ou tecido cerebral transgênico é detectada com um microscópio de fluorescência. Boa concordância é obtida entre os dois métodos. A maioria dos agentes testados tem uma afinidade muito baixa para Abeta {1-42} para ser eficaz clinicamente. Os agentes que podem ter afinidade marginal de acordo com esses testes incluem 1,2,3,4,6-penta-O-galoil-bD-glucopiranose (PGG), S-diclofenaco, galato de epigalocatequina (EGCG), resveratrol e extratos de espirulina , gengibre, ruibarbo, canela, mirtilo e açafrão. Os compostos que não mostraram ligação incluem cilo-inositol, mio-inositol, ramnose, ginkgolide A, emodina, reína, cariofeleno, curcumina, ácido valpróico, tramiprosato e extrato de alho.