Efeitos da curcumina na expressão do receptor gama ativado pelo proliferador de peroxissoma e na translocação / redistribuição nuclear em células estreladas hepáticas de rato ativadas por cultura

Fundo: A função do receptor gama ativado por proliferador de peroxissoma (PPARgama) na fibrogênese hepática permanece amplamente desconhecida. A curcumina é uma substância natural extraída da Curcuma Longa Linn e tem uma variedade de efeitos farmacológicos. Neste estudo, foram investigados os efeitos da curcumina na proliferação, ativação e apoptose de células estreladas hepáticas de rato (HSCs) por meio da sinalização do PPARgama.

Métodos: HSCs foram isolados de ratos Sprague Dawley normais através de perfusão in situ do fígado com Pronase E e centrifugação em gradiente de densidade com Nycodenz. As células foram tratadas com curcumina, troglitazona, ácido salvianólico B ou GW9662. O efeito na proliferação de HSCs foi determinado por colorimetria MTT. O RNA total foi extraído pelo reagente TRizol e os níveis gênicos foram determinados por RT-PCR semiquantitativo. As proteínas celulares e nucleares totais foram isoladas e separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato de sódio a 10%. Os níveis de proteína foram determinados por Western blot. A apoptose celular foi detectada por coloração Hoechst 33258. A distribuição subcelular do PPARgama foi detectada por coloração imunofluorescente. As atividades de MMP-2 e 9 foram medidas pelo ensaio zimógrafo de gelatina.

Resultados: A curcumina suprimiu a proliferação de HSCs de uma maneira dependente da dose. Como os HSCs sofreram ativação gradual com prolongamento da cultura, o nível de expressão nuclear do PPARgama diminuiu. A curcumina regulou positivamente a expressão de PPARgama e inibiu significativamente a produção de alfa-SMA e colágeno I. O PPARgama é expresso no citoplasma e no núcleo e é distribuído uniformemente em HSCs, mas se acumulou no núcleo de HSCs e desapareceu do citoplasma após o tratamento com curcumina. A coloração com Hoechst 33258 mostrou que a curcumina induziu a apoptose de HSCs ativados por cultura e aumentou significativamente a expressão de Bax pró-apoptótica e reduziu a expressão de Bcl-2 anti-apoptótica. O gene da ciclina D1, a proteína NFkappaB p65 ativada e a expressão da proteína TGFbetaR-I foram reguladas negativamente de forma significativa pela curcumina. As atividades de MMP-2 e MMP-9 foram aumentadas significativamente pela curcumina.

Conclusões: A curcumina pode inibir a proliferação e ativação de HSCs, induzir a apoptose de HSCs ativados e aumentar as atividades de MMP-2 e MMP-9. Os efeitos da curcumina são mediados pela ativação da via de transdução de sinal do PPARgama e associados à translocação / redistribuição nuclear do PPARgama.