Efeito da curcumina na progressão do ciclo celular e apoptose em células do músculo liso vascular

1. Os possíveis mecanismos dos efeitos antiproliferativos e apoptóticos da curcumina (diferuloilmetano), um polifenol da cúrcuma, nas células do músculo liso vascular foram estudados na linha de células do músculo liso da aorta de ratos (A7r5). 2. A resposta proliferativa foi determinada a partir da absorção de [3H]-timidina. A curcumina (10 (-6) -10 (-4) M) inibiu estimulada por soro [3H]- incorporação de timidina de células A7r5 e células de músculo liso vascular cultivadas em coelho de uma maneira dependente da concentração. A viabilidade celular, conforme determinada pelo método de exclusão do corante azul de tripano, não foi afetada pela curcumina na faixa de concentração de 10 (-6) a 10 (-5) M em células A7r5. No entanto, o número de células viáveis ​​após o tratamento com curcumina 10 (-4) M foi menor do que o valor basal (2 x 10 (5) células). 3. Para analisar as várias fases do ciclo celular, [3H]A incorporação de -timidina no DNA foi determinada a cada 3 h. Após estimulação com soro fetal de bezerro, as células quiescentes A7r5 iniciaram a síntese de DNA em 9 a 12 h (fase G1 / S), atingindo o máximo em 15 a 18 h (fase S). A curcumina (10 (-6) -10 (-4) M) adicionada durante a fase G1 / S ou a fase S inibiu significativamente [3H]incorporação de -timidina. 4. Após o tratamento com curcumina (10 (-6) -10 (-4) M), a análise do ciclo celular utilizando citometria de fluxo de células coradas com iodeto de propídio revelou uma parada G0 / G1 e uma redução na porcentagem de células na fase S. A curcumina a 10 (-4) M também induziu a apoptose celular. É sugerido que a curcumina interrompeu a proliferação celular e induziu a apoptose celular e, portanto, reduziu a [3H]incorporação de -timidina. 5. O efeito apoptótico da curcumina 10 (-4) M também foi demonstrado por coloração com hematoxilina-eosina, marcação com dUTP nick end mediada por TdT (TUNEL) e escada de DNA. A curcumina (10 (-4) M) induziu o encolhimento celular, a condensação da cromatina e a fragmentação do DNA. 6. A atividade da proteína tirosina quinase membranosa estimulada pelo soro em células A7r5 foi significativamente reduzida pela curcumina na faixa de concentração de 10 (-5) a 10 (-4) M. Por outro lado, a atividade da proteína quinase C citosólica estimulada pelo forbol o éster foi reduzido em 10 (-4) M de curcumina, mas não foi afetado por concentrações mais baixas (10 (-6) -10 (-5) M). 7. Os níveis de c-myc, p53 e bcl-2 mRNA foram analisados ​​usando uma técnica de reação em cadeia da polimerase de transcrição reversa (RT-PCR). O nível de mRNA de c-myc foi significativamente reduzido pelo tratamento com curcumina (10 (-5) -10 (-4) M). E, o nível de bcl-2 mRNA foi significativamente reduzido por 10 (-4) M de curcumina. No entanto, a alteração do nível de mRNA de p53 pelo tratamento com curcumina (10 (-5) -10 (-4) M) não atingiu significância. Os efeitos da curcumina nos níveis de mRNA de c-myc e bcl-2 foram então confirmados por Northern blotting. 8. Nossos resultados demonstram que a curcumina inibiu a proliferação celular, interrompeu a progressão do ciclo celular e induziu a apoptose celular em células do músculo liso vascular. A curcumina pode ser útil como um modelo para o desenvolvimento de drogas para prevenir as alterações patológicas da aterosclerose e reestenose pós-angioplastia. Nossos resultados sugerem que o efeito antiproliferativo da curcumina pode ser parcialmente mediado pela inibição da atividade da proteína tirosina quinase e da expressão do mRNA de c-myc. E, o efeito apoptótico pode ser parcialmente mediado através da inibição da atividade da proteína tirosina quinase, atividade da proteína quinase C, expressão de mRNA de c-myc e expressão de mRNA de bcl-2.