Desenvolvimento e validação de novos métodos de determinação de melatonina e seus metabólitos oxidativos por cromatografia líquida de alta eficiência e eletroforese capilar, utilizando otimização multivariada

A melatonina (N-acetil-5-metoxitriptamina, MEL) tem merecido muita atenção em decorrência de suas múltiplas funções. MEL é um potente antioxidante endógeno e um eliminador de radicais livres que reage com vários tipos de radicais gerando vários metabólitos. Dois deles são N1-acetil-N2-formil-5-metoxiquinurenina (AFMK) e N1-acetil-5-metoxiquinurenina (AMK). Esses compostos são importantes porque também têm ações antioxidantes, bem como outras propriedades biológicas importantes. No presente trabalho, desenvolvemos dois métodos para detectar e quantificar esses compostos (MEL, AFMK e AMK) na mesma amostra. Para tanto, utilizamos um delineamento experimental e utilizamos as técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-DAD) e cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) com detector de arranjo de diodos em ambas. O limite de detecção / quantificação para MEL, AFMK e AMK foram, respectivamente, 44/94, 18/38 e 23/51 ng mL (-1) usando HPLC e 13/44, 37/124 e 47/156 ng mL (- 1) usando MEKC. É a primeira vez que esses compostos são separados no mesmo cromatograma ou eletroferograma. O tempo de análise foi mais rápido usando MEKC. Além disso, esta técnica apresentou melhor resolução, mas HPLC ofereceu melhor limite de detecção e quantificação para metabólitos. Ambos os métodos foram validados e os coeficientes de correlação foram superiores a 0,999 e o intervalo de recuperação desses métodos foi de 99,6-103,7%. A precisão foi avaliada como repetibilidade e precisão intermediária com derivação padrão relativa <5%. Quando uma solução de 5 µg mL (-1) desses compostos foi analisada com os dois métodos, não observamos diferenças estatisticamente significativas. Além disso, analisamos 3COHM (cíclico-3-hidroximelatonina), outro metabólito conhecido da melatonina, usando os mesmos métodos. O emprego desses métodos oferecerá uma ferramenta útil para contribuir para responder ao papel de MEL, AFMK e AMK no sistema biológico e ambos os métodos podem ser usados ​​em análises de rotina para esses compostos.