A melatonina pode ser metabolizada diferencialmente no rato para produzir N-acetilserotonina além de 6-hidroximelatonina

É geralmente aceito que o metabolismo do hormônio pineal melatonina (aMT) consiste na 6-hidroxilação seguida de conjugação com sulfato ou glucuronídeo. O ensaio urinário de 6-hidroximelatonina (6-HaMT) é valorizado como um meio de fornecer informações integradas sobre a produção de aMT. No entanto, mostramos, neste estudo, que aMT possui dois metabólitos urinários principais, N-acetilserotonina (NAS), bem como 6-HaMT. Os ratos receberam doses variadas de aMT e suas urinas foram coletadas e analisadas por cromatografia em camada delgada e cromatografia gasosa-espectrometria de massa (GCMS). A cromatografia em camada fina dos metabólitos urinários mostrou o padrão esperado, um ponto principal em Rf 46%, a posição de 6-sulfatoximelatonina, um ponto menos intenso em Rf 32%, a posição de 6-glicuronídeo-melatonina e um ponto fraco em Rf 78%, o metabólito não conjugado. No entanto, após a desconjugação e derivitização, a análise de GCMS das urinas, ou da mancha em Rf 46%, mostrou dois produtos, um dos quais tinha o mesmo tempo de retenção de GC e espectro de massa do 6-HaMT, enquanto o outro tinha a retenção de GC tempo e espectro de massa de NAS. Quando aMT deuterado foi administrado, a análise de GCMS mostrou a presença de 6-HaMT deuterado e NAS deuterado, provando que o NAS foi metabolizado diretamente a partir de aMT e não produzido em outro lugar do corpo em resposta a aMT. Finalmente, a análise de GCMS das urinas após a administração de 6-HaMT ou de NAS mostrou apenas um produto metabólico em cada caso, ou seja, 6-HaMT e NAS, respectivamente. Isso sugeriu que a conversão de aMT em 6-HaMT e NAS resultou de duas vias metabólicas independentes. É compreensível que os pesquisadores que confiaram inteiramente na cromatografia não tenham conseguido distinguir NAS e seus conjugados do 6-HaMT e seus conjugados, uma vez que as propriedades cromatográficas e de coloração dos dois indóis são quase indistinguíveis.