3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]Sítios de ligação solubilizados de sulfonato de propano -1 para 2-[125I]iodomelatonina em cérebro de galinha retém sensibilidade a nucleotídeos de guanina

Ligação de 2-[125I]iodomelatonina para 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]Os locais solubilizados de sulfonato de -1-propano (CHAPS) do prosencéfalo de pinto foram rápidos. reversível, saturável, de alta afinidade e de seletividade farmacológica. As análises de Scatchard mostraram que 2-[125I]iodomelatonina se liga a um único local com valores de constante de dissociação de equilíbrio (KD) de 328 +/- 22 (n = 4) e 302 +/- 26 pM (n = 3) e um número máximo de locais de ligação (Bmax) de 36,2 + / – 2,0 e 49,5 +/- 6,6 fmol / mg de proteína nas frações solubilizada e de membrana, respectivamente. Os valores de KD obtidos a partir da razão das constantes cinéticas (k2 / k1) nas preparações solubilizadas e de membrana foram 228 e 216 pM, respectivamente. Estudos de inibição indicaram a seguinte ordem de afinidades farmacológicas para membrana e locais solubilizados: 2-iodomelatonina maior que melatonina maior que 6-cloromelatonina muito maior que prazosina maior que N-acetilserotonina muito maior que serotonina maior que metergolina maior que cetanserina maior que propranolol do que a fentolamina, maior do que a ciproheptadina. Os nucleotídeos de guanil inibiram a ligação de 2-[125I]iodomelatonina em frações solubilizadas e de membrana, convertendo os sítios de ligação de um estado de alta afinidade para um estado de baixa afinidade. Estas descobertas mostram que os locais de ligação solubilizados para a melatonina exibem a ligação específica e as características farmacológicas presentes nos locais ligados à membrana. Além disso, a retenção da sensibilidade aos nucleotídeos de guanina em frações solubilizadas com CHAPS sugere que este procedimento de solubilização é adequado para estudos posteriores voltados para o isolamento, purificação e caracterização molecular de sítios ativos de ligação à melatonina.